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ELISA試劑盒背景深,,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
1 洗滌不充分,,洗后未拍干,,樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留洗液準(zhǔn)確配制;充分洗滌,,靜置15秒,,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,,不要反復(fù)使用,,否則易造成污染。
2 底物污染,,未避光保存,,出現(xiàn)顏色棄去底物,重新配置
3 樣品稀釋液污染棄去稀釋液,,重新配置
4 吸頭重復(fù)使用,,未洗凈或消毒不*吸頭盡可能一次性使用
5 不正確的孵育時(shí)間,溫度(尤其是底物孵育的時(shí)間)為常用的溫育溫度有37℃和室溫,,其次是43℃和2~8℃,。*按照說(shuō)明書(shū)要求。
6 偶聯(lián)抗體(streptavidin-HRP)濃度過(guò)高按照說(shuō)明書(shū)調(diào)整到合適的濃度
7 ELISA板子不正確的貯存酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃,;使用結(jié)合力低點(diǎn)的Elisa板
8 沒(méi)有正確封閉在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動(dòng)物蛋白或延長(zhǎng)封閉時(shí)間
9 樣本溶血嚴(yán)重建議使用非溶血或輕微溶血樣本,,嚴(yán)重溶血樣本會(huì)導(dǎo)致背景偏高。
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