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大黑色素細(xì)胞刺激素(MSH)ELISA試劑盒操作步驟:
①.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
②.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
③.樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL,;空白孔不加,。
④.除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
⑤.棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次 (也可用洗板機(jī)洗板)。
⑥.每孔加入底物A,、B各50μL,,37℃避光孵育15min。
⑦.每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),,在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),,對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
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