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倉鼠組織蛋白酶K試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆
3,、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、 保存------如果樣品不立即使用,,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復孔的盡量做復孔,。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時,。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A,、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8. 取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果,。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
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