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倉鼠組織蛋白酶K試劑盒樣品收集,、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2,、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
操作步驟
1. 使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時(shí)。
4. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A,、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8. 取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
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