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1． 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟：
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔,、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照 50%l,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40%l，然后再加待測樣品 10%l,。加樣將樣品加 于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此重復 5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50%l,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50%l,，再加入顯色劑 B50%l，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50%l,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。
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