ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中封閉更關(guān)鍵

封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn),。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體

非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧,。如果您的背景過高，懷疑封閉不

充分,，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,，或適當(dāng)延長封閉時(shí)間。

如果您一直被背景問題所困擾,，那么也許您該花些時(shí)間來優(yōu)化封閉液,。這可能需要時(shí)間，但也

是值得的,。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑,。您使用的類型須取決于多

個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑,、吸附的抗原,、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特

異性結(jié)合,，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原,、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

zui常用的非離子型去污劑是Tween-20,。這種封閉液便宜,、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特

異結(jié)合上很有用,。但它們只在存在時(shí)起作用,，因?yàn)楹苋菀妆幌吹簟Ｒ虼怂邢礈煲褐幸脖仨毺?/p>

加封閉液,。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),，它會(huì)降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性,。另一

個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。

蛋白封閉液則有所不同,，是*的,。它們與開放位點(diǎn)結(jié)合并封閉，同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗

原分子,。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA),、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組

分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用,。不過,，它的缺點(diǎn)在于能與

Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清,。