要使植物ELISA試劑盒測定得到準確的結(jié)果,，不論是定性的還是定量的,，必須嚴格按照規(guī)定的方法制備試劑和實施測定,。想成功得做好植物Elisa試劑盒實驗就要了解相關(guān)步驟,，請跟我們一起了解學(xué)習(xí)下吧！

首先Elisa試劑盒實驗步是加樣

 在ELISA試劑盒中除了包被外,，一般需進行45加樣,。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性，例如規(guī)定為加樣一滴,。此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管,，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同,。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求準確,。標本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制。加樣時應(yīng)將液體加在孔底,，避免加在孔壁上部,，并注意不可出現(xiàn)氣泡。

Elisa試劑盒第二步保溫

    在ELISA試劑盒中一般有二次抗原抗體反應(yīng),，即加標本后和加結(jié)合物后,，此時反應(yīng)的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定的要求，保溫容器*是水浴箱,，可使溫度迅速平衡,。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋,，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該是金屬的,，傳熱容易,。如用保溫箱，空濕盒應(yīng)預(yù)先放在其中,，以平衡溫度,，這在室溫較低時更為重要,。加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求,。如室溫高于20℃,，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便不時觀察,，待對照管顯色適當(dāng)時,，即可終止酶反應(yīng)

其次Elisa試劑盒的洗滌也是非常關(guān)鍵的

    洗滌在ELISA試劑盒過程中不是反應(yīng)聚,，但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵,。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯待塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的,。因此在ELISA試劑盒測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附,，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。在標本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯一類物質(zhì)即右達到此目的,。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯,，為非離子型的表面張力物質(zhì)，常作為助溶劑,。根據(jù)脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號,，結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯20，在ELISA中為常用,。它的洗滌效果好,，并具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結(jié)合的作用。

    洗滌如不*,，特別在后一次,，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高,。另外,，在間接法中如血清標本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標抗體作用而產(chǎn)生干擾,。

后一步比色

    如陰性對照顏色極淺,，在定性測定中一般可采用目視比色。如用比色計測定結(jié)果,，準確性決定于ELISA板底的平整與透明度和比色計的質(zhì)量,。做好以上幾步，您還擔(dān)心您的實驗不成功嗎,？