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干細(xì)胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA,、HAS或蔗糖等),,并且通常以zui少量的鹽來(lái)進(jìn)行凍干處理,,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過(guò)程中會(huì)沉積于管內(nèi),,形成很薄或不可見(jiàn)的蛋白層,。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,務(wù)必在開(kāi)蓋前先離心,,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時(shí)能否見(jiàn)到白色沉淀均屬正?,F(xiàn)象)。
1.離心:高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘,。
2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行選擇)溶解至說(shuō)明書(shū)要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的產(chǎn)品,,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解),。溶解時(shí)不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間,,待細(xì)胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:
1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,,務(wù)必不可用鹽溶液,,避免過(guò)高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,,請(qǐng)依照說(shuō)明書(shū)上的濃度,,同樣也是為了避免過(guò)高的鹽濃度。
3.分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640,、DMEM或PBS等溶液,,其中含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)來(lái)穩(wěn)定蛋白,。工作液在4℃可保存1周,,如需長(zhǎng)期保存,則需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-80℃),。干細(xì)胞分裝時(shí)每管中工作液的體積是一次實(shí)驗(yàn)的用量,,以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一只工作液,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低,。
人肝星形細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人胎盤(pán)羊膜細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人卵巢上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人卵巢成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
干細(xì)胞
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