ATCC細(xì)胞的傳代培養(yǎng)（*天） 
   1) 顯微鏡觀察母細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),，確定傳代比例,。 
為了獲得較高的轉(zhuǎn)染效率,，必需保證細(xì)胞處于合適的生長(zhǎng)密度,，因此應(yīng)根據(jù)母細(xì)胞的生長(zhǎng)密度調(diào)整傳代比例,。磷酸鈣轉(zhuǎn)染的合適細(xì)胞密度為50％－70%,，本實(shí)驗(yàn)中使用的293細(xì)胞長(zhǎng)成致密單層后一般按照1：6傳代即可。 
   2) 在酒精燈旁打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋,，倒去皿中的細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液,，加入2mlHank’s液，輕輕搖動(dòng),，將溶液倒出,。 
   3) 消化與分裝。 
在培養(yǎng)皿中加入1ml消化液（0.53mMEDTA, 0.05%胰蛋白酶液）,，37°C靜置5分鐘左右,，顯微鏡觀察，如果細(xì)胞變圓且彼此分離表明消化*,，此時(shí)可加入10ml營(yíng)養(yǎng)液終止消化,，吹打數(shù)次，使培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞全部脫落下來(lái),，并分散形成均勻的細(xì)胞懸液,。按照傳代的比例補(bǔ)加適當(dāng)體積的營(yíng)養(yǎng)液，吹打混勻后分裝到新的培養(yǎng)皿中,。 
在分裝好的細(xì)胞培養(yǎng)皿上做好標(biāo)記,，置于37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 
2. 用磷酸鈣介導(dǎo)的外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法在293細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)TNF－R1（第二天） 
   1) 顯微鏡觀察待轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài) 
      a. 觀察細(xì)胞是否污染 
      b. 觀察培養(yǎng)液顏色的變化 
      c. 觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度 
   2) 轉(zhuǎn)染 
      a. 用微量移液器在1.5ml離心管中依次加入10μg（1μg /μl, 10μl）質(zhì)粒DNA（實(shí)驗(yàn)組為T(mén)NF-R1的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體,，對(duì)照組為空載體）,，350μl超純水,，40μlCaCl2(2.5M)溶液，混勻,。 
      b. 在另一1.5ml離心管中加入400μl2×HBS,，將A液分三次緩慢加入，每次加入A液后用吹氣泡的方法混勻,。室溫靜置5分鐘,。 
      c. 將A，B混合液均勻地滴加在待轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞培養(yǎng)液中,，輕輕晃動(dòng)使混勻,。將培養(yǎng)皿置于37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中。 
3. ATCC細(xì)胞的形態(tài)觀察,，“DNA Ladder”的提取及瓊脂糖電泳分析（第三天） 
   1) 顯微鏡觀察過(guò)量表達(dá)TNF-R1（實(shí)驗(yàn)組）和空載體（對(duì)照組）的293細(xì)胞形態(tài)上的差異,。 
   2) 用10ml玻璃吸管將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組培養(yǎng)皿中的細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，收集到15ml離心管中,，2000rpm離心5分鐘,，沉淀用1mlPBS重懸，轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中,，2000rpm離心3分鐘,，去除上清液，加入200μlPBS(0.2mg/ml 蛋白酶 K),，重懸細(xì)胞,，再加入200μlPBS（2％NP40），顛倒混勻,，4°C作用30分鐘,，期間顛倒數(shù)次。12,000rpm離心2分鐘,，吸出上清,，加入1ml乙醇，顛倒混勻,，－20°C靜置10分鐘,，12,000rpm離心10分鐘，沉淀溶于50μl水中,，加入RNaseA(10mg/ml),，37°C靜置20分鐘。 
   3) 在DNA溶液中加入10μlDNA上樣緩沖液,，取出50μl進(jìn)行2％瓊脂糖凝膠電泳,，紫外凝膠成像儀拍照。
100mg    130409-201011    阿莫西林    含量測(cè)定
100mg    130410-200706    氨芐西林    含量測(cè)定
100mg    130411-200307    新霉胺    雜質(zhì)檢查
50mg    130412-200902    頭孢哌酮S異構(gòu)體    系統(tǒng)適應(yīng)性
100mg    130413-200303    醌式利福平    檢查
50mg    130414-8702    3-甲基利福霉素SV    檢查
50mg    130415-200904    α-苯甘氨酸    雜質(zhì)檢查
50mg    130416-201006    7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸    雜質(zhì)檢查
100mg    130417-8701    無(wú)味氯霉素A晶型    檢查
ATCC細(xì)胞