ATCC細胞的傳代培養(yǎng)（*天） 
   1) 顯微鏡觀察母細胞的生長狀態(tài)，確定傳代比例,。 
為了獲得較高的轉染效率,，必需保證細胞處于合適的生長密度，因此應根據母細胞的生長密度調整傳代比例,。磷酸鈣轉染的合適細胞密度為50％－70%,，本實驗中使用的293細胞長成致密單層后一般按照1：6傳代即可,。 
   2) 在酒精燈旁打開培養(yǎng)皿蓋，倒去皿中的細胞營養(yǎng)液,，加入2mlHank’s液,，輕輕搖動，將溶液倒出,。 
   3) 消化與分裝,。 
在培養(yǎng)皿中加入1ml消化液（0.53mMEDTA, 0.05%胰蛋白酶液），37°C靜置5分鐘左右,，顯微鏡觀察,，如果細胞變圓且彼此分離表明消化*，此時可加入10ml營養(yǎng)液終止消化,，吹打數次,，使培養(yǎng)皿壁上的細胞全部脫落下來，并分散形成均勻的細胞懸液,。按照傳代的比例補加適當體積的營養(yǎng)液,，吹打混勻后分裝到新的培養(yǎng)皿中。 
在分裝好的細胞培養(yǎng)皿上做好標記,，置于37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 
2. 用磷酸鈣介導的外源質粒轉染法在293細胞中過量表達TNF－R1（第二天） 
   1) 顯微鏡觀察待轉染細胞的生長狀態(tài) 
      a. 觀察細胞是否污染 
      b. 觀察培養(yǎng)液顏色的變化 
      c. 觀察細胞的生長密度 
   2) 轉染 
      a. 用微量移液器在1.5ml離心管中依次加入10μg（1μg /μl, 10μl）質粒DNA（實驗組為TNF-R1的哺乳動物細胞表達載體，對照組為空載體）,，350μl超純水,，40μlCaCl2(2.5M)溶液,，混勻,。 
      b. 在另一1.5ml離心管中加入400μl2×HBS，將A液分三次緩慢加入,，每次加入A液后用吹氣泡的方法混勻,。室溫靜置5分鐘。 
      c. 將A,，B混合液均勻地滴加在待轉染的293細胞培養(yǎng)液中,，輕輕晃動使混勻。將培養(yǎng)皿置于37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中,。 
3. ATCC細胞的形態(tài)觀察,，“DNA Ladder”的提取及瓊脂糖電泳分析（第三天） 
   1) 顯微鏡觀察過量表達TNF-R1（實驗組）和空載體（對照組）的293細胞形態(tài)上的差異。 
   2) 用10ml玻璃吸管將實驗組和對照組培養(yǎng)皿中的細胞輕輕吹打下來,，收集到15ml離心管中,，2000rpm離心5分鐘，沉淀用1mlPBS重懸,，轉移到1.5ml離心管中,，2000rpm離心3分鐘,，去除上清液，加入200μlPBS(0.2mg/ml 蛋白酶 K),，重懸細胞,，再加入200μlPBS（2％NP40），顛倒混勻,，4°C作用30分鐘,，期間顛倒數次。12,000rpm離心2分鐘,，吸出上清,，加入1ml乙醇，顛倒混勻,，－20°C靜置10分鐘,，12,000rpm離心10分鐘，沉淀溶于50μl水中,，加入RNaseA(10mg/ml),，37°C靜置20分鐘。 
   3) 在DNA溶液中加入10μlDNA上樣緩沖液,，取出50μl進行2％瓊脂糖凝膠電泳,，紫外凝膠成像儀拍照。
100mg    130409-201011    阿莫西林    含量測定
100mg    130410-200706    氨芐西林    含量測定
100mg    130411-200307    新霉胺    雜質檢查
50mg    130412-200902    頭孢哌酮S異構體    系統(tǒng)適應性
100mg    130413-200303    醌式利福平    檢查
50mg    130414-8702    3-甲基利福霉素SV    檢查
50mg    130415-200904    α-苯甘氨酸    雜質檢查
50mg    130416-201006    7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸    雜質檢查
100mg    130417-8701    無味氯霉素A晶型    檢查
ATCC細胞