清洗與消毒是組織培養(yǎng)實驗的*步，是組織培養(yǎng)中工作量zui大,，也是zui基本的步驟,。體外培養(yǎng)細(xì)胞所使用的各種玻璃或塑料器皿對清潔和無菌的要求程度很高。細(xì)胞養(yǎng)不好與清洗不*有很大關(guān)系,。清洗后的玻璃器皿,，不僅要求干凈透明，無油跡，而且不能殘留任何物質(zhì),。如有毒的化學(xué)物質(zhì)，哪怕殘留0.1個,，也可能影響細(xì)胞生長,。滅菌手段的選擇十分重要，對不同的物品需采用不同的滅菌方法,。假如選用的方法不對,，即使達(dá)到了無菌卻使被滅菌藥品喪失了營養(yǎng)價值、生物學(xué)特性或其他使用價值也不行,。以下在每種滅菌步驟中都介紹其使用范圍,。

三、實驗材料,、用品

1,、材料：無臭氧型紫外燈，微孔濾膜(直徑25)：孔徑為0.22μm,，微孔濾膜(直徑90)：孔徑為0.22 μm,，過濾器(直徑25)。

2,、藥品：70%或75%酒精,，0.1%新潔爾滅，煤酚皂溶液(來蘇兒水),，0.5%過氧乙酸,，乳酸，37%甲醛,，高錳酸鉀,，NaOH，鹽酸,，重鉻酸鉀,，濃硫酸(工業(yè))，DEPC水[體積分?jǐn)?shù)0.1%的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)],。

3,、儀器：超凈臺，干燥箱,，高壓鍋,，過濾器，過濾泵,。

四,、實驗步驟

(一)實驗器具清洗

l 玻璃類 1、主要有：培養(yǎng)瓶，血清瓶,，小青瓶,，移液管，離心管,，試管,，培養(yǎng)皿等。

2,、清洗步驟：

泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具,，自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃,，25min)→烘干→使用,。

注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同,。

l 塑料類

1 塑料類器具主要包括：孔板,，大槍頭，瓶蓋,，濾器,，采血管等。

2 清洗步驟：

(1)孔板,，采血管

泡在有洗潔凈的自來水中→用超聲清洗儀超聲3遍(每遍1小時,，200C)→在含有洗潔凈的自來水中用毛刷或者紗布將各個面刷洗至少25遍→過一遍一蒸水→泡入鹽酸過一個禮拜→從鹽酸中撈出后自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子→用前包裝好照鈷→使用

(2)大槍頭,，蓋子,，濾器

腫瘤細(xì)胞在含有洗潔凈的自來水中用毛刷或者紗布將各個面刷洗至少25遍→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘，200C)→自來水沖洗→過三遍一蒸水(每遍3次),，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子→用前包裝好滅菌→使用

注意：(1)烘孔板時溫度不應(yīng)太高,，烘干后用報紙包裹，裝入箱子內(nèi),，照鈷,，便可使用。

(2) 新的培養(yǎng)瓶蓋子泡舊5%稀鹽酸1天→再用2%NaOH煮20min →自來水沖洗→洗潔精清洗→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘,，200C)→沖洗15遍→過三遍一蒸(每遍3次)→過三遍三蒸水→烘干使用
1,2,4,5-環(huán)己烷四甲酸二酐(>98.0%(T))   英文名稱：   1,2,4,5-Cyclohexanetetracarboxylic Dianhydride   質(zhì)量規(guī)格：   >98.0%(T)           CAS號：   2754-41-8
1,2,4,5-四甲基苯(NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC))   英文名稱：   1,2,4,5-Tetramethylbenzene   質(zhì)量規(guī)格：   NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC)           CAS號：   95-93-2
1,2,4,5-四氯苯(標(biāo)準(zhǔn)品)   英文名稱：   1,2,4,5-Tetrachlorobenzene   質(zhì)量規(guī)格：   分析標(biāo)準(zhǔn)品           CAS號：   95-94-3
1,2,4,5-四氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.104mg/ml,基體:異辛烷)   英文名稱：   1,2,4,5-Tetrachlorobenzene solution   質(zhì)量規(guī)格：   0.104mg/ml,基體:異辛烷           CAS號：   95-94-3
腫瘤細(xì)胞

腫瘤細(xì)胞清洗與滅菌

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