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TSK-Gel凝膠色譜柱清洗方法
閱讀:2429 發(fā)布時間:2017-7-24
親水性乙烯基樹脂基質(zhì)蛋白分離用色譜柱,,除了可選用鍵合了離子交換基團(tuán)的離子交換柱外,還可選用疏水反應(yīng),、親和等其他多種類型的柱子。
這些類型的色譜柱,,其充填介質(zhì)化學(xué)穩(wěn)定性好,,不易發(fā)生由于官能基脫落而導(dǎo)致樣品組分洗脫位置變化的現(xiàn)象。盡管如此,,由于柱子的反復(fù)使用,,在長時間使用后,樣品組分的洗脫情況還是會發(fā)生改變的,。其原因與樣品中極微量的附吸物在柱中的蓄積有關(guān),。特別由于生物樣品組分復(fù)雜,這種吸附現(xiàn)象時有發(fā)生,。(非特異性吸附)當(dāng)觀察到這樣的現(xiàn)象后,,應(yīng)使用合適的溶劑將蓄積的吸附物質(zhì)去除,以恢復(fù)柱子的性能,。
1,、0.1-0.2mol/L NaOH水溶液(ABA-5PW柱不適用)
測定狀態(tài)下,用0.1-0.2mol/L的NaOH水溶液通過樣品進(jìn)樣閥清洗數(shù)次(3-5回),。
2,、20-40% 醋酸水溶液
與上述NaOH水溶液的清洗方法相同,。
3、在淋洗液中添加水溶性有機(jī)溶劑(疏水性吸附物質(zhì)的去除)
在淋洗液中添加甲醇,、乙腈等水溶性有機(jī)溶劑(濃度《20%)進(jìn)行過柱清洗,。(注意鹽的析出)
4、在淋洗液中添加尿素,、中性界面活性劑(難溶性蛋白的去除)
在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面活性劑(Triton,、Tween、Brij等)后進(jìn)行過柱清洗,。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留,。
通常情況下,使用方法1和2便可將吸附物質(zhì)去除,。如果方法1和2不能恢復(fù)柱效,,則可使用方法3和4。注意,,在附吸成分其吸附力較強(qiáng)時,,即使進(jìn)行過清洗,柱性能也有可能得不到恢復(fù),。