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液相色譜柱安裝與使用
閱讀：2677 發(fā)布時(shí)間：2017-7-10液相色譜儀由高壓液體泵,、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成,，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵,；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路,。
? 液相色譜儀由高壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成,，其中液相色譜柱的正確安裝和使用,，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路,。
一,、液相色譜柱的安裝：
1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a,、空柱由柱接頭,、柱管及濾片組裝而成,。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件,，一端是為7/16英寸外螺紋,，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化)。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,，中間放置壓壞用于密封,。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封,。為了盡量減少柱外死體積,，在安裝色譜柱時(shí)，用Φ1.57mm連接管通過(guò)空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,，然后再擰緊空心螺釘,。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過(guò)壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸)。
在兩端柱接頭內(nèi),，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng)),，用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì),，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性,，故使用時(shí)要注意,，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕,。
b,、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定,。
正相柱：多以硅膠為柱填料,。根據(jù)外型可分為無(wú)定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10 µm的范圍內(nèi),。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì),，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料,。也有無(wú)定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8,、C4,、C2、苯基等,，其顆粒粒徑在3—10 µm之間,。
2,，色譜柱的安裝：
a、拆開(kāi)柱包裝盒,，確認(rèn)色譜柱的類型,、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑,。
b,、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c,、 按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向,，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱),；柱的出口與檢測(cè)器連接,。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管,。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán),。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過(guò)空心螺釘,、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘,，直到擰不動(dòng)為止,，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過(guò)大,。如色譜柱通過(guò)流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象,，請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止,。
二,、液相色譜柱的使用：
色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測(cè)試,，并將結(jié)果保存起來(lái),，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動(dòng)相,、柱溫等條件的差異而有所不同；另外,，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*條件),，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性,。
1,、樣品的前處理：
a,、使用流動(dòng)相溶解樣品。
b,、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
、使用0.45µm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì),。
2,、流動(dòng)相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a,、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
b,、流動(dòng)相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c,、流動(dòng)相的黏度要盡量小,，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降,，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度),。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng),。如使用UV檢測(cè)器,，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
e,、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行,。
f,、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣,。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3,、流動(dòng)相流速的選擇：
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,，要追求*柱效,，使用*流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min,，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳。
當(dāng)選用*流速時(shí),，分析時(shí)間可能延長(zhǎng),。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量),。
液相色譜儀由高壓液體泵、檢測(cè)器及液相色譜柱等三部分組成,，其中液相色譜柱的正確安裝和使用,，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路,。
一,、液相色譜柱的安裝：
1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a,、空柱由柱接頭,、柱管及濾片組裝而成。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu),，柱接頭是兩端螺紋組件,，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國(guó)內(nèi)外已規(guī)范化),。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,，中間放置壓壞用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,，在安裝色譜柱時(shí),，用Φ1.57mm連接管通過(guò)空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘,。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過(guò)壓環(huán)后露出的管長(zhǎng)度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長(zhǎng)或其他固定尺寸),。
在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng)),，用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失,。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì),，能耐受一般的溶劑作用,。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑,，以避免腐蝕,。
b、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的,，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定,。
正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無(wú)定型和球型兩種,，其顆粒直徑在3—10 µm的范圍內(nèi),。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠,。
反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì),，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無(wú)定型和球型之分,。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8,、C4、C2,、苯基等,，其顆粒粒徑在3—10 µm之間。
2,，色譜柱的安裝：
a,、拆開(kāi)柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型,、尺寸,、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b,、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用,。
c、 按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向,，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許,，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測(cè)器連接,。連接管是外徑為1.57mm,、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán),。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積,。連接管通過(guò)空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底,，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘,，直到擰不動(dòng)為止,，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過(guò)大,。如色譜柱通過(guò)流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象,，請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止,。
二,、液相色譜柱的使用：
色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測(cè)試,，并將結(jié)果保存起來(lái),，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動(dòng)相,、柱溫等條件的差異而有所不同；另外,，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*條件),，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性,。
1,、樣品的前處理：
a、使用流動(dòng)相溶解樣品,。
b,、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
,、使用0.45µm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì),。
2、流動(dòng)相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a,、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中),。
b,、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外),。
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果,；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度),。
d,、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制,。
e,、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行,。
f、在流動(dòng)相配制好后,，一定要進(jìn)行脫氣,。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3,、流動(dòng)相流速的選擇：
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效,。對(duì)于一根特定的色譜柱,，要追求*柱效，使用*流速,。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,，流速一般選擇1ml／min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳,。
當(dāng)選用*流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng),?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量),。