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如何應對液相色譜的小情緒？
閱讀：2525 發(fā)布時間：2017-5-22方便快捷的分析過程固然重要,，但是為了多做樣品而忽略了一些*的步驟,，往往得不償失。哪些操作不能做,？哪些懶兒不能偷,？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？液相使用過程中有哪四大關鍵因素要注意,？
流動相不過濾
因為塵?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán),、缸體和單向閥,，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相在玻璃容器內(nèi)蒸餾,，而常用的方法是濾過,，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）,。輸液泵的濾器應經(jīng)常清洗或更換,。
使用后沒有及時清洗泵
流動相不應含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應保留在泵內(nèi),，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下,。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏,，甚至只是由于溶液的靜置,，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等,。因此,，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相,，可以是甲醇或甲醇-水）,。
流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞,、缸體或密封環(huán),，zui終產(chǎn)生漏液。
沒有流動相流出,，又無壓力指示怎么辦,？
可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可打開泄壓閥,，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉(zhuǎn),，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體,。另一個可能原因是密封環(huán)磨損,，需更換,。
壓力和流量不穩(wěn)了？
原因可能是氣泡,，需要排除,；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥,，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗,。有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯?，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡,，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解,，再立即清洗,。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞,，需要清除和清洗,。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行,。
在進行梯度洗脫時,，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化,，因此帶來一些特殊問題,，必須充分重視：
梯度洗脫的流動相選擇不當
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相,。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意,。當有機溶劑和緩沖液混合時,，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心,。
忽略的空白梯度洗脫
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,，以保證良好的重現(xiàn)性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫,，以辨認溶劑雜質(zhì)峰,，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣,，以防止混合時產(chǎn)生氣泡,。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
混合溶劑的粘度常隨組成而變化,，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小,，當二者以相近比例混合時粘度增大很多,，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力,。
關于六通閥的正確使用和維護：
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾,，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢,，更不能停留在中間位置,，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增,，甚至超過泵的zui大壓力,；再轉(zhuǎn)到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞,。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中,，每次分析結(jié)束后應沖洗進樣閥。通?？捎盟疀_洗,，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗,。
關于色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要,，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中,，需要注意下列問題，以維護色譜柱,。
調(diào)節(jié)流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行,，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。
反沖色譜柱
一般說來色譜柱不能反沖,，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效,。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH）,，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱,，分析柱是鍵合硅膠時,，預柱為硅膠,，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解,。
避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱,。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換,。