HTR8/SVneo細(xì)胞,，人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞

1） 來(lái)源：蒂科生物細(xì)胞庫(kù)

2） 形態(tài)：貼壁 上皮樣

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6） 運(yùn)輸：順豐發(fā)貨

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：90% DMEM+10%FBS(推薦HAKATA貨號(hào):HN-FBS-500）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,，5%二氧化碳

傳代：

1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無(wú)菌操作臺(tái),，打開(kāi)瓶口,，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代,，一般2到3天換一次液；

2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%,，需要對(duì)其進(jìn)行傳代,，傳代比例為1:2到1:4；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,，置于37°孵育消化（diyi次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為zu,、ijia消化時(shí)間,，記錄zu、ijia消化時(shí)間,，以便于下次消化）,，消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,，使之*脫落,，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min,，棄上清,，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代,。

凍存：

建議使用本公司無(wú)血清細(xì)胞凍存液貨號(hào)：H-W-100,，用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用,。

保存條件：液氮存儲(chǔ)

溫馨提示：（常見(jiàn)問(wèn)題,，處理方式）

T25瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

注：diyi次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

*細(xì)胞：M001 3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 DMEM(H)+10%NCS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣

M002 NIH/3T3 小鼠胚胎細(xì)胞 DMEM(H)+10%NCS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣

M003 Raw264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 部分懸浮 圓形

M004 B16-F10 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣和紡錘形混合

M005 B16 小鼠黑色素瘤細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣和紡錘形混合

M006 CT26.WT 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣

M007 SV40 MES 13 小鼠腎小球系膜細(xì)胞 DMEM/F12(3:1)+14 mM HEPES+5%FBS 貼壁 肌成纖維細(xì)胞樣

M008 F9 小鼠畸胎瘤細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M009 MLE-12 小鼠肺泡上皮細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M010 Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣

M011 BV 2 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞   1640+10%FBS 貼壁 上皮樣 多種混合

M012 DC2.4 小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞 1640+10%FBS 貼壁 樹(shù)突狀

M013 U14 小鼠子宮頸癌細(xì)胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M014 M-NFS-60 小鼠骨髓性白血病細(xì)胞 1640+10%fbs+62 ng/ml M-CSF+0.05mM2-巰D基D乙D醇 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣

M015 mMSC 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 DMEM/F12+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣

M016 HL-1 小鼠心肌細(xì)胞 DMEM+10%FBS 貼壁 成肌細(xì)胞樣

M017 tm3 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞 df12+5%hs+5%fbs 貼壁 上皮樣

M018 k7m2.wt 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞 DMEM+10%FBS 貼壁 成骨細(xì)胞樣

M019 mc3t3 e1 小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣

M020 hepa1-6 小鼠肝癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮樣

HTR8/SVneo細(xì)胞,，人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞