95D細(xì)胞人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞

1） 來源：蒂科生物細(xì)胞庫

2） 形態(tài)：貼壁 上皮細(xì)胞樣  

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6） 運輸：順豐發(fā)貨

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：DMEM+10% FBS（推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,，5%二氧化碳

傳代：

1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時的緩沖,，.然后置于無菌操作臺,，打開瓶口,，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代,，一般2到3天換一次液；

2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,，需要對其進(jìn)行傳代,，傳代比例為1:2到1:4；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,，置于37°孵育消化（diyi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓,、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zuijia消化時間,，記錄zuijia消化時間，以便于下次消化）,，消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落,，然后收集細(xì)胞懸液,，1200rpm離心3min，棄上清,，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，進(jìn)行傳代。

凍存：

建議使用本公司無血清細(xì)胞凍存液貨號：H-W-100,，用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,，不能預(yù)熱后使用。

保存條件：液氮存儲

溫馨提示：（常見問題,，處理方式）

T25瓶為例,；

1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

注：diyi次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

蒂科生物論文基金獎勵方法

獎勵對象：

使用HAKATA系列產(chǎn)品(HAKATA全系列：血清,、凍存液,、試劑、細(xì)胞株等)培養(yǎng)細(xì)胞并在中文核心期刊雜志或SCI期刊雜志發(fā)表文章,，且文章中材料和方法欄中標(biāo)注我公司品牌名或公司名(英文：HAKATA或Shanghai Chuanqiu Biotechnology Co.,Ltd, China,，中文:HAKATA或蒂科生物)

該獎勵方案長期有效，歡迎大家與我們分享獲得成果的喜悅,！

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