Hylone,、HAKATA培養(yǎng)基,，常備現(xiàn)貨，*

如何正確選擇細(xì)胞培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)是實驗室里zui常見和zui基本的實驗了,，但卻不是zui簡單的,。別小看細(xì)胞培養(yǎng)，這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問,。有時候細(xì)胞狀態(tài)不好,，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做,。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多,，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起,。 

Hylone、HAKATA培養(yǎng)基,，常備現(xiàn)貨,，*

經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，HAKATA,、HyClone,、Sigma等。其中DMEM,、RPMI-1640,、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基,。其他如M199,、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng),。 

◆ MEM是由Eagle’s基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的,，其中增加了組分的范圍及濃度。 

◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計的,，現(xiàn)在常用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),。

DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍,，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用,。zui初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細(xì)胞的生長需要,，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L,，這就是大家常說的低糖和高糖了。 

◆ aMEM含有附加的氨基酸,、維生素以及核苷和脂肪酸,，它可廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類型，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細(xì)胞,。 

◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計的,，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用,，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物,，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。 

◆ RPMI-1640培養(yǎng)基是專為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計的,，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),。 

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以前經(jīng)常聽到有人問,，這種細(xì)胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單,，也可以好復(fù)雜,。此話怎講?如果這種細(xì)胞是購自ATCC 或其他的細(xì)胞庫，那很簡單,，問供應(yīng)商就行了,。或者找到相關(guān)的文獻(xiàn),，作為參考,。 Invitrogen上有一個Cell Line Database的工具，也很好用,。選擇你感興趣的細(xì)胞類型,，它就會彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等,，有時還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟,，很方便。Sigma上也有一個Media Expert,，包括了培養(yǎng)基所有成分的功能描述,、使用推介和參考文獻(xiàn)等，它還是一個解決問題能手,，對于細(xì)胞培養(yǎng)中的常見問題,，如細(xì)胞貼壁不好、培養(yǎng)基變色等,，它都會列出可能的原因,，并提供補(bǔ)救辦法。這個Expert果然不簡單!  但如果你是著手建立一種全新細(xì)胞的培養(yǎng)體系,，根本找不到任何參考,，那你就得花點時間自己試驗了。萬事開頭難嘛,。因為沒有一個標(biāo)準(zhǔn)答案,。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長,?？傊?/span>shou選MEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng),、RPMI 1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養(yǎng)基來,，然后花大約兩周的時間做一個簡單的細(xì)胞生長實驗,，來選擇其中zui適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的zui佳培養(yǎng)條件與文獻(xiàn)報道的不同,，就算是同一種培養(yǎng)條件,，細(xì)胞的生長狀態(tài)也時好時壞,，這是很正常的。因為試劑,、水,、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性,，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手,。 

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以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基,，但配制過程就較為繁瑣,，要溶解、調(diào)pH值,，過濾,，過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差，而且有些實驗室的水質(zhì)并不理想,，所以培養(yǎng)的效果會有差異,。如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會減少,，因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的,，批間差會很小。大家是不是感覺液體培養(yǎng)基會貴很多,，以前是這樣,，但現(xiàn)在非也。HyClone和Invitrogen都在國內(nèi)建立了液體培養(yǎng)基的生產(chǎn)基地,，生產(chǎn)和運輸成本大幅降低,，所以現(xiàn)在的價格也只是50-60元/500ml，比干粉培養(yǎng)基貴不了多少,，而且還幫你省了過濾器和時間,。 

血清含有生長因子可促進(jìn)細(xì)胞的繁殖，含有附著因子可促進(jìn)細(xì)胞的貼壁,，同時還具有抗胰酶活性,。血清同時也是礦物質(zhì)、脂類及激素的來源,。zui常用的血清有小牛血清,、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等,。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的,。采血時間越早，營養(yǎng)物質(zhì)越豐富，所含抗體也越少,，因而胎牛血清適合要求高的細(xì)胞系和克隆化培養(yǎng),。由于瘋牛病的原因，到目前為止,，我國政府仍然禁止從北美洲,、歐洲和日本等地區(qū)進(jìn)口牛血清，因此市面上的牛血清大多來自澳洲,、南美洲,，或是國產(chǎn)的。  而血清批次間的差別就是不可避免的,，這種差異來源于不同的制備方法和除菌方法,、動物的年齡差別及血清的儲存條件等，而且與取血動物的來源關(guān)系密切,。不同的牧場,、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質(zhì)量。因此選好了一種血清就要盡可能長期使用它,。在需要更換時,，也要盡量保持與原有的一批血清相似。

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現(xiàn)在很多公司都提供血清預(yù)留,，你一旦選定了某個批次的血清，zui好備足一年的量,，這樣可以避免很多麻煩,。血清固然是細(xì)胞培養(yǎng)中*的成分，但正如上文所說,，血清的批間差異大,，更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應(yīng)也是必須要考慮的因素,。由于氣候或瘋牛病的影響,，說不定哪天血清就突然沒得賣了，那對實驗的影響可非同小可,。另外,，血清的價格也很昂貴，雖說現(xiàn)在也有便宜的國產(chǎn)血清,，但是高品質(zhì)的澳洲血清價格仍舊高起,。因此，也有一些實驗室開始換用無血清培養(yǎng)基,。 

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常備現(xiàn)貨液體培養(yǎng)基：