豬口蹄抗原(區(qū)分野毒與疫苗毒)ELISA試劑盒

1. 血清標(biāo)本收集,、處理、保存方法：

用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,，全血標(biāo)本室溫放置1－2 h或4℃隔夜,，然后4℃、3000 rpm/min離心20 min,，小心收集上清,。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間），避免反復(fù)凍融,。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本,。

2. 血漿標(biāo)本收集、處理,、保存方法：

根據(jù)樣本要求選擇EDTA或肝素鈉或枸緣酸鈉作為抗凝劑,，用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，室溫混合20 min左右,，然后4℃,、3000 rpm/min離心20 min，小心收集上清即為血漿,。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間）,，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本,。

3. 尿液標(biāo)本收集,、處理、保存方法：

用干凈容器收集尿液,，4℃,、3000 rpm/min離心20 min，小心收集上清,。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間）,，避免反復(fù)凍融。

4. 唾液標(biāo)本收集,、處理,、保存方法：

用干凈離心管收集唾液，4℃,、3000 rpm/min離心20 min,，小心收集上清。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間）,，避免反復(fù)凍融,。

5. 細(xì)胞標(biāo)本收集、處理,、保存方法:

（1）細(xì)胞培養(yǎng)上清

 取細(xì)胞培養(yǎng)上清到干凈離心管中,，4℃,、3000 rpm/min離心20 min，小心收集上清,。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間）,，避免反復(fù)凍融。

（2）細(xì)胞裂解液

收集細(xì)胞培養(yǎng)液,，4℃,、3000 rpm/min離心20 min，棄去上清,，用預(yù)冷的PBS（0.01M,，PH 7.4）洗滌三次。加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞,。通過(guò)反復(fù)凍融,，使細(xì)胞充分裂解。然后4℃,、10000 rpm/min離心20 min,，除去細(xì)胞碎片，取上清,。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間）,，避免反復(fù)凍融。

6. 植物標(biāo)本收集,、處理,、保存方法：

取適量大小組織塊（一般0.2－0.5 g），用預(yù)冷的PBS緩沖液（0.01M,，PH 7.4）漂洗三次，濾紙拭干水分,。準(zhǔn)確稱重,，放入勻漿管中，加入4倍體積的勻漿介質(zhì)（0.05 mol/L Tris-HCl,，pH 7.4 PBS緩沖液）于勻漿管中,，冰水浴條件下，剪碎組織塊,，手工勻漿或機(jī)器勻漿,，制成勻漿液。4℃,、10000 rpm/min離心20 min,，取上清。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間）,，避免反復(fù)凍融,。

7. 糞便標(biāo)本收集、處理、保存方法：

采集時(shí)用干凈的竹簽挑取糞便樣本到離心管中,，向離心管中加入適量PBS緩沖液（0.01M,，PH 7.4），攪拌均勻,。然后4℃,、10000 rpm/min離心20 min，小心收集上清,。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間）,，避免反復(fù)凍融。

8. 組織標(biāo)本收集,、處理,、保存方法：

將組織樣本用PBS緩沖液（0.01M，PH 7.4）沖洗,，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì),。將組織塊稱重，記錄后剪碎（碎塊盡量?。?。將組織按一定的比例（通常組織重量：PBS體積=1：9）加入預(yù)冷的PBS緩沖液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）中勻漿，勻漿時(shí)置于冰上,。吸取勻漿液到離心管中,，4℃、10000 rpm/min離心20 min,，小心收集上清,。置于-20℃（1－2周）或-80℃保存（較長(zhǎng)時(shí)間），避免反復(fù)凍融,。

豬口蹄抗原(區(qū)分野毒與疫苗毒)ELISA試劑盒

1．ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請(qǐng)避光保存,。

豬口蹄抗原(區(qū)分野毒與疫苗毒)ELISA試劑盒

1. 靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力,；2）為試劑對(duì)大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力,。2. 特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。其越高說(shuō)明特異性越好,。 

3. 精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV,，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍

4. 穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲(chǔ)存的時(shí)間,，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存,，定期測(cè)定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo),，直到其質(zhì)量指標(biāo)開(kāi)始下降為止,，通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10℃保存一個(gè)半月。 

5. 簡(jiǎn)便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下,，實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好,，在定性試驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了，定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單,。

6. 安全性：指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無(wú)害無(wú)傳染性,。 

7. 經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。 

試劑評(píng)價(jià)：需要有的確證方法確證的樣品進(jìn)行檢測(cè),，一般實(shí)驗(yàn)室不易取得此類樣品,，每新購(gòu)進(jìn)一次試劑評(píng)價(jià)也很麻煩?？梢酝ㄟ^(guò)間接的回收實(shí)驗(yàn)對(duì)試劑進(jìn)行選擇