產品名稱：小鼠TNF-αELISA試劑盒

ELISA的基本原理是：

①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性,；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結成酶標 抗原（或抗體）,，而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性,；

③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開,，最后結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例,；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a物,，根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析,，以了解被測標本中抗體或抗原含量,。

ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定,。但ELISA測定中影響因素較多,，而且其操作中有一定的技術要求,，在中 除正常反應外，有時?？梢姷揭恍╁e誤結果（即假陽性或假陰性結果）,。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試 劑因素,；③操作因素,。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。 血清是常用的ELISA標本,，血漿一般可視為與血清同等的標本,，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源 性物質和外源性物質兩種,。

樣品收集,、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉離心30分鐘取上清,。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,，這屬于正常現象,，水浴加熱使結晶*溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣本實際濃度,。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0,、7.5、15,、30,、60、120 pg/mL

小鼠TNF-αELISA試劑盒

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒性能

1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,，大于等于0.9900,。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。

4. 重復性：板內,、板間變異系數均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。

6. 有效期：6個月

免責聲明

1.  試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果,，由實驗者承擔,，本公司概不負責。

2.  嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作,，后果由實驗者承擔