HUVEC人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞    

1） 來源：蒂科生物細(xì)胞庫

2） 形態(tài)：貼壁 上皮細(xì)胞樣

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6） 運(yùn)輸：順豐發(fā)貨

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：ECM（推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,，5%二氧化碳

傳代：

1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,，.然后置于無菌操作臺,，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉,，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液,；

2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,，需要對其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:2到1:4,；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（diyi次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓,、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zuijia消化時(shí)間，記錄zuijia消化時(shí)間,，以便于下次消化）,，消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,，使之*脫落,，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min,，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，進(jìn)行傳代,。

凍存：

建議使用本公司無血清細(xì)胞凍存液貨號：H-W-100，用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用,。

保存條件：液氮存儲

溫馨提示：（常見問題,，處理方式）

T25瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：diyi次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

常見熱賣細(xì)胞：

143B 人骨肉瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

293T 人胚腎細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

A2780 人卵巢癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

A549 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

A673 人尤因肉瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 多邊形

AGS 人胃腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

BGC823 人胃腺癌細(xì)胞(低分化) RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

C33A 人宮頸癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣

CACO2 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 DMEM+20% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣