比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），就以coloncancer為例,，比如HCT15,LS411和KM12,，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育,，但也不需要很多，一般100mm dish,，一次zui多加入500ul,，就足夠了，一般我加300ul,。即使這樣難消化的細胞,，一般不超過5min，即可見細胞成片移動,，就應該停止消化,。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞,，但也只要用少量胰酶孵育,，3min左右即可看到成片沙狀移動。

5,，常規(guī)的細胞實驗（增殖,，凋亡，遷移,，分化之類的）,，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化（難消化細胞例外）即可,。但少數(shù)實驗,，比如病毒包裝，對細胞代數(shù),，對細胞狀態(tài)要求*,。這個時候，胰酶消化,，就是潤洗,，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多,，細胞包裝能力就會逐漸下降（當然也有其它因素影響包裝效率）,。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可,。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性,，來使得細胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白,。