細(xì)胞培養(yǎng)需要的胰酶和雙抗

胰酶和雙抗作為細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中試劑的一部分，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)成功與否存在著關(guān)鍵的作用,。但是對(duì)于胰酶和雙抗的基礎(chǔ)知識(shí)還是要多多了解的，不然就有可能禍禍你的細(xì)胞哦,！

胰酶

胰酶是什么,？

胰酶是一種解離試劑，本質(zhì)是可以降解蛋白的酶,，生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用來(lái)把貼壁細(xì)胞從貼壁面解離下來(lái)和使細(xì)胞解聚,，也可以用于原代細(xì)胞的傳代過(guò)程中分散組織,。

胰酶使用的濃度是多少？

胰酶濃度：常見(jiàn)濃度為0.25%的胰酶（含有螯合劑）,，半貼壁細(xì)胞或者對(duì)胰酶敏感的細(xì)胞,，可采用0.05%濃度的胰酶（含有或者不含有螯合劑）進(jìn)行細(xì)胞消化。

為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異,？

商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸,，在運(yùn)輸過(guò)程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換,，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的,。由干冰運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右,，在PH值7.2-8.0的時(shí)候,，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色的,。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn),。

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？

簡(jiǎn)單一個(gè)字：能

對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題,，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn),。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請(qǐng)放心使用,。

細(xì)胞消化時(shí),，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響

細(xì)胞消化時(shí)，如果消化液中只有胰酶,，不含EDTA,，不去除是沒(méi)有問(wèn)題的。

如果消化液中含有胰酶和EDTA,，去除,。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca,、Mg離子,，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和,，消化后要*清洗去除,，否則細(xì)胞易脫壁,。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用,。

胰酶的保存

胰酶可在-20℃下保存一年,。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱,。由于胰酶自身也是一種蛋白,，胰酶也會(huì)自己剪切自己，建議胰酶不要反復(fù)凍融,，拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用,。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出,。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存,。

雙抗

什么是雙抗？

雙抗就是青鏈霉素混合液(100X) ,，是專門用于細(xì)胞培養(yǎng)的,，可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)。

雙抗作用是什么,？

雙抗起的作用：抗生素,，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)；避免細(xì)胞污染,。

培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎,？

加不加雙抗不是的，視實(shí)際情況而定,。

如果你實(shí)驗(yàn)室條件足夠好,，如果你操作足夠規(guī)范，就盡量不要加雙抗了,。相反,，如果你實(shí)驗(yàn)條件不夠，操作也沒(méi)有把握,，還是加的好,。的方法是做個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照，看有沒(méi)有必要加雙抗,。

如何加入雙抗,？

在細(xì)胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml,。

如果加多了話對(duì)細(xì)胞毒性太大,，細(xì)胞生長(zhǎng)艱難。加入雙抗時(shí),，一般先加在培養(yǎng)基里,，因?yàn)槿绻侵苯釉趽Q液傳代滴加的話,，那個(gè)雙抗的濃度實(shí)在不好控制。

誤區(qū)：長(zhǎng)期使用抗生素,，以對(duì)抗污染

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不應(yīng)常規(guī)使用抗生素

連續(xù)使用抗生素會(huì)促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生,，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在，一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除,，這種輕度污染zui終將發(fā)展成大規(guī)模污染

連續(xù)使用抗生素會(huì)掩蓋支原體感染及其他隱性污染

有些抗生素會(huì)與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng),，干擾您研究的細(xì)胞過(guò)程

雙抗的保存

雙抗通常情況下在-20℃保存一年。由于該試劑在4℃下長(zhǎng)期存放是不穩(wěn)定的,，應(yīng)分裝后在-20℃下避光保存,。青霉素在2-8的℃存放時(shí)間不應(yīng)超過(guò)4天，鏈霉素相對(duì)穩(wěn)定一點(diǎn),，在2-8℃可以存放30天左右,。切記，雙抗從凍融后里面的基本成分已開(kāi)始降解,。