幾種常見的提取外泌體方法

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外泌體是大小30-200nm的膜性小囊泡,，在血液、尿液,、羊水,、惡性腫瘤、腹水等體液及細(xì)胞培養(yǎng)上清中均存在,。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)和功能性的RNA等生物活性分子,，和體內(nèi)多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。因外泌體攜帶重要的生物信息,，使它具有很重要的潛在應(yīng)用價值,，一方面外泌體可以作為疾病的診斷標(biāo)志物，另一方面外泌體可以作為一種治療手段,，未來有望通過外泌體載藥用于疾病的治療,。正因如此，外泌體的研究持續(xù)高熱度,。

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外泌體研究的首要任務(wù)是對外泌體進行提取純化,，提取外泌體的方法很多，那哪種方法提取外泌體*呢,？

一,、超速離心方法

原理：基于不同顆粒密度、沉降系數(shù)不同,，利用低速離心和高速離心交替進行的方法分離外泌體顆粒,。

優(yōu)點：文獻引用較多，如實驗室設(shè)備條件滿足,，可省成本

缺點：需要大型離心機,，高離心力會損傷外泌體；操作耗時,；步驟繁瑣,；產(chǎn)量不穩(wěn)定（受轉(zhuǎn)子、轉(zhuǎn)速,、起始樣本量等多因素影響）,；起始樣本量需求高

二、密度梯度離心

原理：在超速離心力的作用下,，使氯化銫或蔗糖等介質(zhì)形成密度階層,，通過密度梯度離心,，讓外泌體沉降在某一個密度范圍。

優(yōu)點：純度相對較高

缺點：操作非常復(fù)雜且耗時,，需要大型離心機

三,、免疫磁珠法

表面包被標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后，特異性識別外泌體特異性標(biāo)志物（CD9,、CD81,、CD63等）。

優(yōu)點：操作簡單,、純度較高

缺點：成本高,；產(chǎn)量少，只能收集一類exosome,，損失多,；步驟繁瑣；種屬特異性限制,；需要磁力架和冷凍離心機等儀器

四,、PEG沉淀法

聚乙二醇（PEG）可與水分子形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，捕獲一定粒徑大小的外泌體顆粒,。

優(yōu)點：操作簡單,；不需要大型離心機等儀器

缺點：市面上品牌眾多，大多可靠性差,；發(fā)表文章易受質(zhì)疑等,。

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介紹了這么多種方法，那究竟哪種方法是*的提取外泌體的方法呢,？以上方法都有優(yōu)劣,，并沒有哪一種方法就是*方法，因綜合衡量實驗要求,、實驗室經(jīng)費,、儀器設(shè)備等諸多因素。

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