細(xì)胞培養(yǎng)的污染源有這幾個(gè),，你造嗎？

廣義上來(lái)說(shuō),，凡是細(xì)胞培養(yǎng)體系中的外來(lái)成分或成分變化,，都應(yīng)視為污染，細(xì)胞污染不能*被消除,，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性,。細(xì)胞污染根據(jù)污染源主要可以分為物理性，化學(xué)性和生物性污染,。

（1）物理性污染：

物理性污染通過(guò)影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分,，從而影響細(xì)胞的代謝,，如溫 度,、放射線,、振動(dòng)、輻射(紫外線或熒光)會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響,。常見的例子有：培養(yǎng)箱溫度過(guò)高,、周圍放置能引起機(jī)械振動(dòng)的設(shè)備、試劑放在有玻璃門的冰箱中長(zhǎng)期受到光照等,。物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染,。

（2）化學(xué)性污染：

培養(yǎng)環(huán)境中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細(xì)胞的污染?；瘜W(xué)物質(zhì)并不總是抑制細(xì)胞的生長(zhǎng),，某些化學(xué)物質(zhì)如激素就可促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)。未純化的物質(zhì),、試劑,、水、血清,、生長(zhǎng)輔助因子及儲(chǔ)存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來(lái)源,。為了避免金屬離子、有機(jī)分子,、細(xì)胞內(nèi)毒素等物質(zhì)對(duì)水的污染,，在配制液體，清洗容器時(shí)必須使用不含雜質(zhì)的超純水,。細(xì)胞培養(yǎng)使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,，并經(jīng)過(guò)機(jī)構(gòu)的鑒定，實(shí)驗(yàn)者本人也應(yīng)對(duì)上述成分進(jìn)行純度鑒定,。同時(shí),，正確配置和儲(chǔ)存培養(yǎng)液及試劑也是非常重要的，應(yīng)該采取標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟,，避免液體體積計(jì)算錯(cuò)誤,，混用類似化合物等錯(cuò)誤。

（3）微生物污染：

微生物污染的原因可分為2個(gè)階段：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段和實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程,。準(zhǔn)備階段的原因包括：實(shí)驗(yàn)耗材滅菌不*,；細(xì)胞房清潔度不夠，增加微生物污染風(fēng)險(xiǎn),；超凈臺(tái)潔凈度不夠,，消毒不夠*，紫外線沒有預(yù)先照射足夠時(shí)間,，表面沒有用酒精擦拭,；沒有帶無(wú)菌乳膠手套,；試劑本身已經(jīng)污染，沒有檢測(cè)出來(lái),。實(shí)驗(yàn)操作中的污染,，往往是不夠嚴(yán)謹(jǐn)，粗心大意造成,，如：手從無(wú)菌試劑的上方經(jīng)過(guò),；移液器操作不當(dāng)，液體接觸到移液器前端,；移液管吸液過(guò)猛,；槍頭沒有更換，較差污染等,。

不同的微生物污染物對(duì)細(xì)胞的影響也有差別,，微生物中支原體和病毒對(duì)細(xì)胞形態(tài)和技能的影響是長(zhǎng)期的，緩慢的和潛在的,。而霉菌和細(xì)菌增殖迅速,，能在很短的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺滅細(xì)胞。

   1,、霉菌污染：種類很多,，污染的多是曲霉菌，白色念珠菌,，酵母菌,，黑霉菌，孢子菌等,。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的漂浮物,，一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn),，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不變混濁,。倒置顯微鏡下可以看見細(xì)胞之間有縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀，樹枝狀或管狀菌絲,，并漂浮在培養(yǎng)液中,。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形,，散在細(xì)胞上及細(xì)胞周邊生長(zhǎng),。處理：確認(rèn)是霉菌污染，如果細(xì)胞種類不是特別的珍貴,，直接放棄,，并將實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)*消毒。萬(wàn)不得已,，可以嘗試抗霉菌素如兩性霉素B來(lái)清楚污染,，實(shí)際操作中效果很難保證,。

 2、細(xì)菌污染：細(xì)菌污染較常見的有大腸桿菌,，白色葡萄球菌,，假單孢菌等。加用抗菌素的培養(yǎng)液可預(yù)防和排除個(gè)別一般少量細(xì)菌的污染,。一旦發(fā)生細(xì)菌污染很容易發(fā)現(xiàn),，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短時(shí)間內(nèi)變黃,，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生,，出現(xiàn)明顯渾濁現(xiàn)象；有時(shí)靜置的培養(yǎng)液起初不混,，但稍加震蕩,，就有許多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察,，可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮,，有時(shí)在細(xì)胞表面及周圍有大量細(xì)菌存在，細(xì)胞停止生長(zhǎng)并有中毒表現(xiàn),。必要時(shí)可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以明確細(xì)菌種類,；有的培養(yǎng)液改變不明顯而有疑似污染，亦可向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)地入少量培養(yǎng)液,，37度培養(yǎng)以檢測(cè),。處理：一般用抗生素的常用量的5~10倍作沖擊療法，用藥24~48小時(shí)后再換常規(guī)培養(yǎng)液,，有時(shí)在早期污染時(shí)此法有效,。

3、支原體污染：支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(zui小直徑0．2um)并獨(dú)立生活的微生物．約有1%可通過(guò)濾菌器,。支原體無(wú)細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性．可為圓形,、絲狀或梨形。

支原體形態(tài)多變,，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu),。多數(shù)支原體適合于偏堿條件下生存(PH7．6—8．0)，對(duì)酸耐受性差,。對(duì)熱比較敏感,，對(duì)一般抗生素不敏感。支原體污染細(xì)胞后．培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁．多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著,，細(xì)微變化也可由于傳代,、換液而緩解，因此易被忽視,。但個(gè)別嚴(yán)重者,，可致細(xì)胞增殖緩慢．甚至從培養(yǎng)器皿脫落,。為確定有無(wú)支原體污染可做熒光染色法：用能與DNA特異性結(jié)合的熒光染料，可使支原體內(nèi)含有的DNA著色,，染色后用熒光顯微鏡觀察,。處理：市場(chǎng)上有多種支原體清除的試劑盒，效果比較好,。

（4）細(xì)胞交叉污染

    細(xì)胞污染和細(xì)菌污染不同,，細(xì)胞污染是由于在培養(yǎng)過(guò)程中各種細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行，而所用器具或液體混雜使用所致,。這種污染沒有微生物存在,，但使培養(yǎng)細(xì)胞不同種類之間發(fā)生混亂，細(xì)胞生長(zhǎng)特性,，形態(tài)發(fā)生變化,。污染過(guò)的細(xì)胞由于種類不純，無(wú)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,。

    防治及處理：在進(jìn)行多個(gè)種類細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),，所有器具要嚴(yán)格區(qū)分，對(duì)每一種細(xì)胞按順序進(jìn)行操作,，避免一起操作時(shí)造成的混亂,；進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，滴管或槍頭要及時(shí)更換,，避免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液瓶中,；所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染,，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定,，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用,。