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一股認(rèn)為,,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)抱培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存,、生長(zhǎng),、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程,、細(xì)胞瘍變,、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。
那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng),,我們應(yīng)該怎么做呢?一股有以下兩種方法:
一,、貼壁細(xì)胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,。
2,、加入1ml左右消化液(胰蛋白鱷或與EDTA混合液)輕輕接動(dòng)培養(yǎng)瓶,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中.
3,、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,,發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí),,棄去消化液,,加入培養(yǎng)液終止消化。
4,、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,,置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng).第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
二,、懸浮細(xì)胞的傳代
1,、直接傳代
①讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3,。
②用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后,,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
2,、離心法傳代
①將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),離心800-1 OOOrpm, 5分鐘,。
②去除上清,,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液,。
③將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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