細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下,，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞,，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存,、生長和繁殖的方法,。通過細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞,，以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。

細(xì)胞復(fù)蘇流程：

1,、將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出,，立即放入37°C的水浴中進(jìn)行融化，輕柔晃動,，加速融化,，直到小瓶中只剩下一小塊冰，時長應(yīng)控制在1min中,；

2,、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無菌操作臺中，打開瓶蓋前,，用酒精燈火焰對瓶口進(jìn)行消毒,；

3、將預(yù)加熱的新鮮*培養(yǎng)基滴入小瓶中,。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中,，加入適量濃度和體積的*培養(yǎng)基，輕柔混合均勻,；

4,、200 × g左右細(xì)胞懸浮液離心5-10分鐘。實際的離心速度和持續(xù)時間因細(xì)胞類型而異,。棄掉上清,，加入新鮮*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并將其轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中,。

注意事項：

1,、液氮溫度低，小心低溫對人造成的傷害,，在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時存在爆炸的風(fēng)險,，因此,，取出凍存管的時候，要做好個人防護(hù),。

2,、通常細(xì)胞集中儲藏在液氮中，取出時應(yīng)迅速,，避免溫差對其他凍存細(xì)胞造成影響,。

3、復(fù)蘇細(xì)胞的核心技術(shù),，簡而言之就是快融,，將在37°C水浴中快速解凍冷凍細(xì)胞(< 1分鐘。

4,、解凍時,，凍存管先放入無菌一次性PE手套中,，再放入水中融化,，避免污染也方便操作。

5,、用預(yù)熱過的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細(xì)胞,。

6、解凍細(xì)胞后,，在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時,，應(yīng)盡量維持高密度，以提高細(xì)胞存活率,。

7,、注意無菌操作，避免細(xì)胞發(fā)生污染,。