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培養(yǎng)基的組成成分包括三大類:營養(yǎng)物質(zhì),、凝固物質(zhì)、抑制劑和指示劑,。
(一)營養(yǎng)物質(zhì)
盡管不同的細菌對營養(yǎng)的要求不同,,但細菌需要的營養(yǎng)物質(zhì)應含有水、氮源,、碳源,、無機鹽類和生長因子等,常用的營養(yǎng)物質(zhì)如下:
1.蛋白胨:蛋白胨是制備培養(yǎng)基時常用的成分之一,,提供細菌生長繁殖所需要的氮源,。是動物或植物蛋白質(zhì)經(jīng)酶或酸堿分解而成。植物胨和動物胨各有優(yōu)點,,配制培養(yǎng)基常將兩者按一定比例混合使用,,提高培養(yǎng)基的營養(yǎng)價值。蛋白胨易溶于水,,遇酸不沉淀,,不因受高溫而凝固,并為兩性電解質(zhì)有緩沖作用,。但吸水性強,,應注意干燥密封保存。
2.肉浸液:是用新鮮牛肉浸泡,、煮沸而制成的肉汁,。其中含有可溶性含氮浸出物(肌酸、黃piao呤,、腺嘌呤,、次黃piao呤核苷酸、谷氨酸、甘氨酸等)和非含氮浸出物(肝糖,、乳酸,、琥珀酸、磷酸己糖,、脂肪,、無機鹽類等)。還有一些生長因子,。肉浸液可為細菌提供氮源和碳源,,但肉浸液中所含氮物質(zhì)過少而不能滿足細菌的需要,因此在制備培養(yǎng)基時應再加入1%~2%的蛋白胨和0.5%氯化鈉,。
3.牛肉膏:由肉浸液經(jīng)長時間加熱濃縮而制成,。糖類在加熱過程中被破壞,所以其營養(yǎng)價值低于肉浸液,,但因無糖可用作腸道桿菌鑒別培養(yǎng)基的基礎成分,。由于使用方便,常用于制備培養(yǎng)基,。
4.糖類,、醇類:為細菌生長提供碳源和能源。制備培養(yǎng)基所用的糖類,、醇類有多種,,常用的糖類有單糖(葡萄糖、阿拉伯糖等),、雙糖(乳糖,、蔗糖等)和多糖(淀粉、菊糖等),;常用的醇類有甘露醇,、衛(wèi)茅醇等。除葡萄糖,、蔗糖主要作為碳源和能源的基本成分外,,其他糖類和醇類主要用于鑒定細菌所做的發(fā)酵反應。
5.血液:血液中既含有蛋白質(zhì),、多種氨基酸,、糖類、無機鹽類等營養(yǎng)物質(zhì),,又能提供輔酶(如V因子),、血紅素(X因子)等特殊生長因子,所以培養(yǎng)基中加入血液用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高的細菌,。另外,,還可根據(jù)細菌在血液培養(yǎng)基中的溶血現(xiàn)象而進行鑒定,。
6.無機鹽類:提供細菌生長的各種元素,如:鉀,、鈉,、鐵、鎂,、鈣,、磷、硫等,。用于制備培養(yǎng)基的無機鹽類有多種,,其中常用的有氯化鈉和磷酸鹽,前者對維持酶的活性,、調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外的滲透壓非常重要,,后者是細菌良好的磷源,并在培養(yǎng)基中具有緩沖作用,。
7.雞蛋和動物血清:雖然不是構成培養(yǎng)基的基本成分,但卻是某些細菌生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì),,所以僅用于制備一些特殊的培養(yǎng)基,,這些細菌直接從雞蛋和動物血清中獲取營養(yǎng)。如培養(yǎng)結核分枝桿菌的雞蛋培養(yǎng)基和培養(yǎng)白喉桿菌的呂氏血清培養(yǎng)基等,。
8.生長因子:是細菌生長所必需的,,但需要量很小。在制備培養(yǎng)基時,,常在肝浸液,、肉浸液、酵母浸液和含血液培養(yǎng)基中加入維生素,、氨基酸,、嘌呤、嘧啶等生長因子,。
(二)凝固物質(zhì)
制備固體培養(yǎng)基時,,需要在液體中加入凝固物質(zhì)。常用的凝固物質(zhì)為瓊脂,,特殊情況下也可用明膠,、卵白蛋白、血清等,。
瓊脂是從石花菜中提取出來的一種半乳糖膠,,當溫度達98℃以上時可溶于水,在45℃以下則凝固成凝膠狀態(tài),,是一種理想的固體培養(yǎng)基賦形劑,。因其不被細菌分解利用,故無營養(yǎng)作用。
(三)抑制劑和指示劑
在制備培養(yǎng)基時常加入抑制劑和指示劑,,這些并不是細菌生長繁殖所必需的物質(zhì),,而是由于選擇、鑒定及判斷結果的需要,。
1.抑制劑:抑制劑必須具有選擇抑制作用,,在制備培養(yǎng)基時加入一定種類的抑制劑,目的在于抑制非檢出菌(非病原菌)的生長,,以利于檢出菌(病原菌)的生長,。抑制劑的種類很多,可根據(jù)不同的目的選用不同的抑制劑,。常用的有膽鹽,、煌綠、亞硫酸鈉,、亞硒suan鈉及一些染料和某些抗生素等,。
2.指示劑:在培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑,是為了便于觀察細菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖,、醇類,。常用的有酚紅、中性紅,、甲基紅,、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍,、中國藍等酸堿指示劑,。美藍常用作氧化還原指示劑。
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