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當(dāng)前位置:蒂科(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>培養(yǎng)細(xì)胞需要注意什么,?
1,、選擇正確的培養(yǎng)基
在養(yǎng)細(xì)胞之,,就要了解,你所養(yǎng)細(xì)胞的來源以及種類和名稱,,查閱一定量的文獻(xiàn),,確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分,常用的細(xì)胞培養(yǎng)液有DMEM,、RPMI1640,、F12等等,一些常見的細(xì)胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來培養(yǎng),,有的需要加入一定其他成分,,這需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型,查ATCC細(xì)胞庫或者查文獻(xiàn),,才能找到所需合適培養(yǎng)液,。選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細(xì)胞的步。
2,、了解細(xì)胞的生長習(xí)性
不同的細(xì)胞生長習(xí)性不同,。如成纖維細(xì)胞是貼壁生長,有一定的密度依賴性,,密度小可能會出現(xiàn)不增殖,,狀態(tài)差的情況,接種密度大時(shí)則需要隔天傳代,,頻繁傳代則影響細(xì)胞狀態(tài),;再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞,,是懸浮生長的,傳代需離心棄去上清即可,??傊私饧?xì)胞生長習(xí)性,,再加上正確的計(jì)數(shù),,才能掌握好傳代的密度,。
3,、選擇好的血清
血清中含有細(xì)胞生長所必須的生長因子,作為哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的附加物,,血清的添加是十分重要的,,因此,選擇好的血清,,是細(xì)胞養(yǎng)殖成功與否的關(guān)鍵,!
4、及時(shí)傳代和更換培養(yǎng)液
在細(xì)胞增殖到一定的密度后,,要及時(shí)傳代,,根據(jù)細(xì)胞的生長速度和密度,及時(shí)更換培養(yǎng)液,。更換過勤,,浪費(fèi)培養(yǎng)液,更換不夠及時(shí),,則細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)差,,一般需隔天更換培養(yǎng)液,具體可根據(jù)所養(yǎng)細(xì)胞種類予以調(diào)整,。
5,、絕對的無菌意識
面林林總總?cè)慷甲⒁夂昧耍绻麩o菌意識差,,細(xì)胞中混入了微生物,,則千里之堤潰于蟻穴,細(xì)菌的生長速度和破壞力,,將迅速占培養(yǎng)皿,,破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),有些初學(xué)者會在培養(yǎng)液中加入1%的雙抗,,但是,,無菌意識不強(qiáng),雙抗亦無法拯救你的細(xì)胞,!
6,、傾心的呵護(hù),,頻繁的觀察
做到以上幾點(diǎn),就可以開始養(yǎng)你的細(xì)胞了,,但是再次重申細(xì)胞嬌弱,,在養(yǎng)細(xì)胞的過程中,難免會出現(xiàn)一些意想不到的問題,,要想成功養(yǎng)好細(xì)胞,,時(shí)時(shí)惦記它 ,頻繁地觀察,,初期一天觀察2次都不足為過,,出現(xiàn)任何預(yù)料外的情況,及時(shí)處理,,才能保障收獲一盤“漂亮"的細(xì)胞,。
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