大部分貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細(xì)胞存在,，也會有一些圓形細(xì)胞脫落懸浮的情況存在,，這種主要是一些新增殖的細(xì)胞或由于局部空間不足被擠出的細(xì)胞,，只要細(xì)胞持續(xù)增殖,，都會有一些圓形細(xì)胞或脫落漂浮細(xì)胞，不影響細(xì)胞整體增殖和實(shí)驗(yàn),，保持正常換液,、傳代周期即可。細(xì)胞具體情況也可以參考細(xì)胞庫不同細(xì)胞照片比對,，大部分貼壁細(xì)胞都會有圓形細(xì)胞,、脫落細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)顆粒等情況,。

如何消除組織培養(yǎng)的污染,？

當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染,。首先,，確定污染物是細(xì)菌、真菌,、支原體或酵母,，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,，檢查 HEPA 過濾器,。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性，因而,，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素 B 和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟,。

1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。

2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,，或幾個小培養(yǎng)瓶中,。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中,。例如,，兩性霉素 B 推薦下列濃度，0.25,，0.50,，1.0，2.0,，4.0,8.0 mg/ml。

3)每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo),，如脫落,，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓,。

4)確定抗生素毒性水平后,，使用低于毒性濃度 2-3 倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞 2-3 代。

5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代,。

6)重復(fù)步驟 4,。

7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 4-6 代，確定污染是否以已被消除,。