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原代細(xì)胞如何取材,,這些你都會嗎,?

時間:2022-2-9閱讀:936

一、取材的基本要求
1.取材要注意新鮮和保鮮
2.應(yīng)嚴(yán)格無菌
3.防止機械損傷
4.去除無用組織和避免干燥
5.應(yīng)注意組織類型,、分化程度,、年齡等
6.作好記錄

二、各類組織的取材技術(shù)
皮膚和粘膜的取材
內(nèi)臟和實體瘤的取材
血液細(xì)胞的取材
骨髓,、羊水,、胸/腹水細(xì)胞取材
動物組織取材
人胚體組織取材
雞(鴨)鳥類胚胎組織取材

皮膚和粘膜的取材
主要取自于手術(shù)過程中的皮片,方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作,,但面積一般2~4c㎡,。

內(nèi)臟和實體瘤的取材
內(nèi)臟除消化道外基本是無菌的,但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位,,實體瘤取材時要取腫瘤細(xì)胞豐富的區(qū)域,,要避開破潰、壞死液化部分,,以防污染,,盡量去除混雜的結(jié)締組織。

血液細(xì)胞的取材
血細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞的取材,,一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾,、扁桃體,、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細(xì)胞,取材時應(yīng)注意抗凝,。

骨髓,、羊水、胸/腹水細(xì)胞取材
嚴(yán)格無菌,,注意抗凝,還要盡快分離培養(yǎng),,離心后,,用無鈣、鎂PBS洗兩次,,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),,不宜低溫存放。

動物組織取材
鼠胚組織取材
首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物,,然后將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中,,5min后(注意時間不能太長,以避免酒精從口或其他通道進入體內(nèi),,影響組織活力),,取出動物,在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢,,切開皮膚,,用無菌操作法解剖取胚或用無菌止血鉗挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開皮膚,,用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾,,把動物反包,暴露軀干,,然后再固定,,更換無菌解剖器材,采用無菌操作法解剖取出胚胎,。

幼鼠胚腎(或肺)取材
幼鼠采用上述方法處死消毒后,,腹部朝上固定在木板上,先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè):然后采用無菌法打開胸腔取肺,,或背部朝上固定在木板上,,先將背部毛皮切開游離并拉向兩側(cè),然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎,。

人胚體組織取材
取材方法與鼠類相同
雞(鴨)鳥類胚胎組織取材步驟
(1)取孵化至適當(dāng)胚齡(9~12天)的胚蛋,,用照蛋燈在暗處燈檢,若有豐富血管,、胚體有運動的胚蛋,,說明胚體發(fā)育良好,并用有色筆劃出氣室和胚體位置。
(2)將胚蛋置于蛋架上,,先用溫水清洗蛋殼,,再用75%酒精棉球擦干;
(3)經(jīng)碘酒,、75%酒精消毒后,,在無菌條件下采用無菌法用剪刀或中號鑷子打開氣室,沿氣室邊緣去除蛋殼,;
(4)用眼科鑷撕去殼膜,,暴露出雞胚;
(5)用彎頭鑷輕挑起胚頭,,取出胚胎,,放入無菌平皿中,解剖取材,。

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