1. 操作步驟

（1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,。

（2）向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量,。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜,。

（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在 倒置顯微鏡 下進(jìn)行觀察,，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化,。

（4）吸出消化液,，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶,，把殘留消化液沖掉,，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化,，在吸除胰蛋白液后,，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化,。

（5）使用彎頭吸管,，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞,，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液,。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細(xì)胞,。

（6）用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后,，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

（7） 細(xì)胞培養(yǎng) 換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來(lái)確定,。一般2～3d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面,，即可使用,；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液。

2. 注意事項(xiàng)

（1）掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間,，消化時(shí)間過(guò)短時(shí),，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落,、損傷,。