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當(dāng)前位置:蒂科(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>胎牛血清的這些指標(biāo)你都知道嗎,?
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能,。
1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物,。
2. 提供結(jié)合蛋白,,能識(shí)別維生素、脂類,、金屬和其他激素等,,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,,起到解毒作用,。
4.是細(xì)胞貼壁,、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用,。
6.提供蛋白酶抑制劑,,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害,。
胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo)
一,、內(nèi)毒素
內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的*成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí),,才表現(xiàn)其毒性,。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,,對(duì)細(xì)胞毒性越小,,越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代;內(nèi)毒素含量過高,,會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化,。國(guó)際上規(guī)定,胎牛血清的級(jí)別,,應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來確定,,其中,特級(jí)胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml
二,、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會(huì)根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色,、淡黃色、橘紅色,、微紅色等,。細(xì)胞培養(yǎng)用血清的標(biāo)準(zhǔn)是血紅蛋白含量不高于20mg/dl,顏色越紅,,數(shù)值越高,;反之,數(shù)值越低,。實(shí)際上,,血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無直接影響。這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,,良好的操作能降低血清的溶血,。
三、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,,數(shù)值偏高,,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛,;數(shù)值偏低,,表明血清可能摻水了,。
四、pH值
根據(jù)藥典,,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒有什么具體依據(jù)把進(jìn)口血清和國(guó)產(chǎn)血清用7.5這個(gè)分界線界定,。
五,、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測(cè)一般采用冰點(diǎn)法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間
六,、微生物
包括細(xì)菌,、霉菌、支原體,、噬菌體等,。隨著各個(gè)品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌,、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制,。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。如CellMax胎牛血清,,3次0.1um無菌過濾以后,,又通過培養(yǎng)法和DNA染色法進(jìn)行支原體檢測(cè),結(jié)果均呈現(xiàn)陰性才會(huì)放行銷售,。關(guān)于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,,又無法過濾,很難*清除,,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大,,不過對(duì)于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來說,往往會(huì)采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體,。
七,、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血時(shí)的牛齡情況,新生牛血清容易產(chǎn)生IgM,,IgG的含量也偏高,;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也較低,??梢酝ㄟ^血清蛋白電泳SDS檢測(cè)。
低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產(chǎn)及相關(guān)領(lǐng)域,。
有下列情況者,,對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:
1.養(yǎng)干細(xì)胞時(shí),干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感,,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí),,干細(xì)胞很容易死亡,。很多使用者,在血清在試用前,,就通過提早審核該批次《檢測(cè)報(bào)告》,,以決定是否入圍進(jìn)行試用。
2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí),,過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。
3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),,培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),,任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會(huì)讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,,謬以千里",。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí),選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),,對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要,;
4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合,、細(xì)胞轉(zhuǎn)染,,或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞,、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增,,這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此,,挑選更低的內(nèi)毒素,,是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。
5.實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞,,需要長(zhǎng)期培養(yǎng),、長(zhǎng)期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇,、經(jīng)常培養(yǎng)的,,血清會(huì)經(jīng)常或長(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞,。為保證細(xì)胞的健康,,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)久對(duì)細(xì)胞的毒性影響,。
總之,,血清中內(nèi)毒素含量過高,更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康",,造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn),,或細(xì)胞狀態(tài)不良,、老化、甚至死亡,,導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗,。血清中的內(nèi)毒素越低越好。
全球細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)會(huì)均依據(jù)內(nèi)毒素對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行分級(jí)和命名,。
內(nèi)毒素含量越低的血清,,級(jí)別就越高,以胎牛血清為例:
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),,此血清為特級(jí)胎牛血清;
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,,≤ 25EU/ml時(shí),,此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),,此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清,;
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