血清是細(xì)胞培養(yǎng)中外源添加的成分不確定的物質(zhì),，血清的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)成敗起著關(guān)鍵性作用，但血清使用不當(dāng)也可能會(huì)導(dǎo)致血清質(zhì)量下降,，造成細(xì)胞培養(yǎng)效果不理想,。今天來(lái)給大家聊聊血清使用中的一些疑惑，幫助大家理清頭緒,，實(shí)驗(yàn)開(kāi)展順順利利,。

怎樣確定血清使用濃度？

這個(gè)只能通過(guò)測(cè)試了,。原則上血清添加量不要太多,，通常分為5%、10%,、20%幾檔,。部分細(xì)胞原代提取時(shí)會(huì)使用20%血清，大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)時(shí)會(huì)使用5%～10%的血清濃度,。至于某一株細(xì)胞適應(yīng)什么樣的血清濃度,，還需要根據(jù)細(xì)胞特性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖鰷y(cè)試和調(diào)校,。

血清使用前需要離心嗎,？

這個(gè)問(wèn)題我理解為兩種可能。

其一,，因?yàn)檠迦诮夂笥小靶鯛钗?析出,。如果沒(méi)有出現(xiàn)其他異常情況,，或者血清只是用于細(xì)胞培養(yǎng),，那么*沒(méi)有必要離心去除。我們知道血清析出的“絮狀物"主要是血纖蛋白,，其在血清中含量很高,，而且高度不溶，在血清凍融過(guò)程中極易析出,，但它也是*無(wú)害的,，甚至能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。另外,，它還增強(qiáng)了血清黏性,，為細(xì)胞提供了額外的機(jī)械緩沖。在其析出過(guò)程中，會(huì)粘附培養(yǎng)體系中其他成分,，離心去除,，反而會(huì)損失營(yíng)養(yǎng)成分。

其二,，實(shí)驗(yàn)要求純凈的培養(yǎng)體系,。培養(yǎng)的細(xì)胞需要進(jìn)一步鑒定，如免疫熒光,、流式,、共聚焦拍照等，細(xì)胞表面如果有黏性較強(qiáng)的血纖蛋白,，勢(shì)必會(huì)影響效果,。那么，建議400g離心5min即可,。如果需要進(jìn)行精密實(shí)驗(yàn),，如分離外泌體等，那么就需要至少100000g離心1.5h以上

血清滅活和不滅活有什么不一樣,？

在回答這個(gè)問(wèn)題之前,，我們先要弄清楚滅活究竟滅的是什么成分的活性。其實(shí)56℃,、30min的處理只能去除補(bǔ)體和部分其他蛋白的活性,。補(bǔ)體是免疫系統(tǒng)的一部分，在體內(nèi)可通過(guò)多條途徑被激活,，從而發(fā)揮調(diào)理吞噬,、裂解細(xì)胞、介導(dǎo)炎癥,、免疫調(diào)節(jié)和清除免疫復(fù)合物等多種作用,。血清滅活的說(shuō)法最早是在細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展初期，大部分實(shí)驗(yàn)室還在使用小牛血清甚至成體動(dòng)物血清,，或者以前培養(yǎng)某些人源細(xì)胞時(shí)會(huì)添加人血清,。因?yàn)檠骞w已與環(huán)境長(zhǎng)期接觸，體內(nèi)免疫系統(tǒng)已經(jīng)經(jīng)歷了一場(chǎng)又一場(chǎng)的戰(zhàn)斗,，而保留了“豐厚的戰(zhàn)利品"——抗體,、補(bǔ)體等，這些成分在體內(nèi)可以由免疫系統(tǒng)清除,，但在體外的細(xì)胞培養(yǎng)中,，可能會(huì)對(duì)部分細(xì)胞產(chǎn)生損傷。巧在人們發(fā)現(xiàn)這些成分不耐受高溫,，所以才有了熱滅活處理,。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展到今天,，我們已經(jīng)能把控原材料的質(zhì)量。對(duì)于血清,，我們會(huì)選擇胎牛來(lái)源,。因?yàn)樵隗w內(nèi)有胎盤(pán)屏障的隔離，又尚未接觸體外環(huán)境,，其自身免疫系統(tǒng),、免疫物質(zhì)幾乎為零。這個(gè)時(shí)候,，如果不是對(duì)血清成分的極度苛刻,，再談滅活就有些多余了。甚至因?yàn)闊崽幚?，?dǎo)致血清內(nèi)大量蛋白析出,，同時(shí)粘附其他成分一起丟失，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)而言就得不償失了,。

怎樣為您的細(xì)胞選擇合適的血清,？

目前市面上的血清產(chǎn)品五花八門(mén)，各種品牌宣稱(chēng)來(lái)自各個(gè)血源地,，讓人眼花繚亂,。可以確定的是,，除了所謂的“水貨",，它們當(dāng)中絕大多數(shù)都是質(zhì)量合格的產(chǎn)品。但合格不一定好用,，或者說(shuō)適用于某一種細(xì)胞,。要確定一款血清的性能，或者從眾多血清來(lái)源中挑選一款,，好的辦法就是篩選驗(yàn)證,。

血清的篩選驗(yàn)證主要包括：形態(tài)驗(yàn)證、增殖能力測(cè)試和克隆形成能力測(cè)試,。我們通過(guò)多次傳代,，分辨同細(xì)胞、同代次,、不同血清樣品培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)間的細(xì)微差異,；或者同血清樣品、不同細(xì)胞,、不同代次間，細(xì)胞形態(tài)維持的情況,。我們通過(guò)同一細(xì)胞多次傳代,，每代接種相同細(xì)胞量,，間隔相同時(shí)間后計(jì)數(shù)得到單位時(shí)間倍增數(shù)，確定增殖性能,。又通過(guò)不同細(xì)胞在相同培養(yǎng)面積內(nèi)接種相同的少量的細(xì)胞,，根據(jù)形成的單克隆數(shù)量、大小,，判斷血清支持克隆形成的能力,。

一款血清需要綜合達(dá)到這幾個(gè)性能的高水平表現(xiàn)，才能稱(chēng)為好血清,?；蛘咭豢钛逶谂囵B(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)，這幾個(gè)方面的表現(xiàn)都優(yōu)秀,，才是適用的,。