培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)中*的營養(yǎng)成分,，但是最基礎(chǔ)的培養(yǎng)基卻給實(shí)驗者帶來了一系列的問題。

別小看細(xì)胞培養(yǎng)，這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問。

1.怎樣查到一個特定細(xì)胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件,？

ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接,，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫,。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來源,，培養(yǎng)和凍存條件,，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。

2.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基,？

培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件,。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長,。總之,，優(yōu)選MEM,、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)；RPMI1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng),；

新的細(xì)胞培養(yǎng)時要詳查資料,。

3.自己新配制的液體培養(yǎng)基能保存多久？

我們建議將新配制的培養(yǎng)基放置于4℃,，避光保存盡量在一周內(nèi)使用完畢,，培養(yǎng)基越新鮮越好。

4.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,，可長期保存嗎,？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在一到兩周內(nèi)使用它,。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解,。

5.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？

除了特殊篩選系統(tǒng)外,，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。

為防止細(xì)菌,、真菌污染,，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml,，但是不建議長期使用,。

6.液體培養(yǎng)基可以放-20℃保存嗎？

不可以,！因為在-20℃下,，培養(yǎng)基中的鹽容易析出，培養(yǎng)基融化后,，有的鹽可能無法重新溶解,，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓降低，培養(yǎng)細(xì)胞時,，細(xì)胞容易破裂而死亡,。

7.為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色,，且pH值越來越偏堿性,？

培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出,，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,。而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,， 將造成細(xì)胞生長停滯或死亡,。若培養(yǎng)基偏堿時， 可以通入無菌過濾的CO2,， 以調(diào)整pH 值,。

8.為什么液體培養(yǎng)基1640顏色發(fā)黃，是pH值不對嗎,？

不是,。因為配方原因，1640為減酚紅型,，其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一,，所以是因為酚紅濃度低，而非PH值低,。

9.培養(yǎng)液pH是怎樣影響細(xì)胞生長的,？

由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響,。各種細(xì)胞對PH值要求也不*相同,，原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對PH值變動耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng),。

但總體來說,，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,，偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長。因此,，配制培養(yǎng)用液時可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些,。液體在經(jīng)過0.1um或0.2um濾膜過濾時，PH值會向上浮動0.2左右,。

10.培養(yǎng)液滲透壓是怎樣影響細(xì)胞生長的,？

當(dāng)細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境的分子濃度不同時就會產(chǎn)生滲透壓,。這種情況下,，水分通過滲透流入或流出細(xì)胞，從而改變細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境,。

高滲透壓迫使水分從細(xì)胞中擴(kuò)散出來導(dǎo)致細(xì)胞收縮,，這種情況會使DNA和蛋白遭到破壞，細(xì)胞周期停滯以及最終使細(xì)胞死亡,；反之,，低滲透壓使水分流入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞腫脹破裂,。

11.為什么有客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅,？

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）,。為避免固醇類反應(yīng),，細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是哺乳類細(xì)胞時,，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時,，不使用加酚紅的培養(yǎng)基。

12.酚紅的作用是什么,？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值指示劑：中性時為紅色,，酸性時為黃色，堿性時為紫色,。

13.干粉培養(yǎng)基里含NaHCO3嗎,？

所有的干粉培養(yǎng)基中都不含NaHCO3 。

請依據(jù)說明書或包裝袋上的標(biāo)注,，在干粉培養(yǎng)基*溶解后添加NaHCO3 ,。

14.NaHCO3的作用是什么？

與CO2一起形成緩沖系統(tǒng),，保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定,。

15.我們實(shí)驗室培養(yǎng)箱CO2濃度一直以來都是5%,，這樣可以嗎？

當(dāng)然不可以,，不同的培養(yǎng)基要求添加NaHCO3的量不一樣,，如DMEM要求添加3.7g/L，為了保持PH值穩(wěn)定,，必須用高濃度的CO2平衡,，一般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L,，還有些培養(yǎng)基要求添加更少,，那么這些培養(yǎng)基就要求較低的濃度平衡，一般是5%,。

16.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么,？

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,，但是如果沒有葡萄糖的話,，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,，-20℃保存,，培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什么？

幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺都有較高的要求,。谷氨酰胺脫掉氨基后,，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝,。在缺少谷氨酰胺時,，細(xì)胞生長不良而死亡。所以,，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺,。

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20℃冰凍保存,，用前加入培養(yǎng)基中,。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲存兩周以上時，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺,。

18.在培養(yǎng)基中加入HEPES有何好處,？

培養(yǎng)基中常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng),，但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力,。而HEPES是一種很強(qiáng)的Buffer，加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng),。

Hepes的貯存液濃度一般為1M,，常溫保存,。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培養(yǎng)基中,。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么,？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？這個二肽有多穩(wěn)定,？

GlutaMAX-Ⅰ是一個L-谷氨酰胺的衍生物,，其不穩(wěn)定的a-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用,。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩(wěn)定，即使在121℃滅菌20min,， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解,；而在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解,。

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的,，但其在溶液中不穩(wěn)定，經(jīng)過一段時間后會降解,，確切的降解率一直沒有最終確定,。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性,。因此GlutaMAX-Ⅰ是細(xì)胞培養(yǎng)中谷氨酰胺的替代品,。

20.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？

不能,。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，細(xì)胞大多無法立即適應(yīng),，造成細(xì)胞無法存活,。