QSG-7701細胞| QSG-7701細胞系 培養(yǎng)步驟

產(chǎn)品名稱：QSG-7701細胞

中文名稱：人正常肝細胞,；QSG-7701

規(guī)格：T25

培養(yǎng)步驟：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1,、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

PS：若客戶收到2ml小管細胞,，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),，嚴格無菌操作,；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%,，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存,。若密度超過80%,，可直接進行傳代（方法同上）。

2,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，進行離心收集,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清,，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,，凍存比例為90%FBS+10%DMSO,。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后,，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng),，視情況傳代或者凍存,。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）,。