如何讓您的細胞快速適應(yīng)無血清培養(yǎng)基

有許多細胞系是相對容易適應(yīng)無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基的,，而對環(huán)境變化相對敏感的其它細胞則難以適應(yīng)變化,，這就需要更為專業(yè)的方法來讓細胞適應(yīng)環(huán)境變化。

SIGMA 胎牛血清F2442,，人血清F4552。GEMINI胎牛血清，人血清100-512,無外泌體血清SBI,，均有現(xiàn)貨銷售。

而根據(jù)細胞系的特性,，有兩種方法可使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基,。種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法；另一種方法是直接適應(yīng),。

一,、連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法

種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟,，使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基,。這是優(yōu)先選用的方法，且不對細胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化。

連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法1

使原培養(yǎng)基內(nèi)的細胞連續(xù)地經(jīng)過以下幾個階段：

階段1：75%補加血清的培養(yǎng)基或25%無血清培養(yǎng)基

階段2：50%補加血清的培養(yǎng)基或50%無血清培養(yǎng)基

階段3：25%補加血清的培養(yǎng)基或75%無血清培養(yǎng)基

階段4:100%無血清培養(yǎng)基

連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法2

1,、以原培養(yǎng)基中的相同濃度,，將血清加入無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將細胞從含血清的原培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到加了血清的無血清培養(yǎng)基,，此時應(yīng)注意要提高新培養(yǎng)系統(tǒng)中的細胞密度,。讓細胞有一個適應(yīng)過渡期。

2,、按照方法1,，緩慢地降低血清濃度，使細胞在每個階段有適應(yīng)的時間,。

3,、一旦血清補加量降為0，在用于進行分析或其他操作前,，讓細胞培養(yǎng)物具有數(shù)個適應(yīng)過渡期,。

二、直接適應(yīng)法

另一種方法是直接適應(yīng),。其中,，細胞直接從含血清培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將大量細胞直接轉(zhuǎn)移到無血清或無蛋白的新培養(yǎng)基內(nèi),。細胞必須處于指數(shù)生長期中期,，且存活率>90%。

每3到4天更換約50%的培養(yǎng)基,，以防止培養(yǎng)基變成酸性,。維持高于正常值的細胞培養(yǎng)密度，直至培養(yǎng)的細胞需要每日更換培養(yǎng)基,。這時,，將細胞擴增到多個培養(yǎng)瓶內(nèi)。

考慮建議

在適應(yīng)過程中,，細胞通常對PH和溫度變化較為敏感,。讓細胞在每個階段都至少有一個適應(yīng)過渡期。

細胞存活率和細胞密度

細胞在對數(shù)生長期中期快速分裂,，且在適應(yīng)過程開始時,，存活率大于90%,。這一點至關(guān)重要,。當細胞需傳代時，建議采用1:2或1:3的小傳代比例,，以維持更高的細胞密度,，同時提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長因子。

當細胞適應(yīng)新的培養(yǎng)條件時,，在增大細胞傳代密度,。

細胞生長

如果在適應(yīng)過程中,，細胞停止了生長，則需讓細胞有更多的時間來適應(yīng)培養(yǎng)基組合,。例如,，在方法1的階段4，向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%),。這樣有助于細胞更容易地適應(yīng)新的培養(yǎng)基,。

然后，在幾個過渡期內(nèi),，緩慢地減少血清量,，直至學清量為0。

懸浮培養(yǎng)物

一些公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細胞貼壁因子,。在一段過渡期內(nèi),，貼壁細胞將開始離開表面，并成為懸浮細胞系開始生長,。細胞也可能因適應(yīng)而發(fā)生形態(tài)變化,。監(jiān)測細胞的生長速度，只要細胞能夠與新系統(tǒng)相融合,，任何形態(tài)變化都不重要,。

細胞叢

在適應(yīng)于無血清培養(yǎng)期間，細胞容易形成叢,。傳代培養(yǎng)時,，將叢輕輕折斷，使其分散開,。將培養(yǎng)物從靜止細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶內(nèi),，這樣可能會有助于防止細胞叢的形成。

抗生素

由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,，因此,，不建議在無血清適應(yīng)過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白,，則抗生素水平可能會對細胞產(chǎn)生毒性,。

預(yù)防措施

確保在開始適應(yīng)過程前，儲存有大量原培養(yǎng)基的細胞,。如果細胞沒有存活到下一階段,，則在整個過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶。