Hylone,、HAKATA培養(yǎng)基,，常備現(xiàn)貨,，*

如何正確選擇細(xì)胞培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室里zui常見(jiàn)和zui基本的實(shí)驗(yàn)了,，但卻不是zui簡(jiǎn)單的,。別小看細(xì)胞培養(yǎng)，這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問(wèn),。有時(shí)候細(xì)胞狀態(tài)不好,，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實(shí)驗(yàn)根本就沒(méi)辦法做,。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多,，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說(shuō)起。 

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經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種,，HAKATA,、HyClone、Sigma等,。其中DMEM,、RPMI-1640,、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基,。其他如M199,、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng),。 

◆ MEM是由Eagle’s基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來(lái)的,，其中增加了組分的范圍及濃度。 

◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計(jì)的,，現(xiàn)在常用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),。

DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍,，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用,。zui初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來(lái)為了某些細(xì)胞的生長(zhǎng)需要,，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L,，這就是大家常說(shuō)的低糖和高糖了。 

◆ aMEM含有附加的氨基酸,、維生素以及核苷和脂肪酸,，它可廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類型，包括對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求苛刻的細(xì)胞,。 

◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計(jì)的,，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用,，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物,，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。 

◆ RPMI-1640培養(yǎng)基是專為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的,，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),。 

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以前經(jīng)常聽(tīng)到有人問(wèn)，這種細(xì)胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實(shí)這個(gè)問(wèn)題的答案可以很簡(jiǎn)單,，也可以好復(fù)雜,。此話怎講?如果這種細(xì)胞是購(gòu)自ATCC 或其他的細(xì)胞庫(kù)，那很簡(jiǎn)單,，問(wèn)供應(yīng)商就行了,。或者找到相關(guān)的文獻(xiàn),，作為參考,。 Invitrogen上有一個(gè)Cell Line Database的工具,，也很好用。選擇你感興趣的細(xì)胞類型,，它就會(huì)彈出推薦的培養(yǎng)基,、血清和轉(zhuǎn)染試劑等，有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟,，很方便,。Sigma上也有一個(gè)Media Expert，包括了培養(yǎng)基所有成分的功能描述,、使用推介和參考文獻(xiàn)等,，它還是一個(gè)解決問(wèn)題能手，對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)中的常見(jiàn)問(wèn)題,，如細(xì)胞貼壁不好,、培養(yǎng)基變色等，它都會(huì)列出可能的原因,，并提供補(bǔ)救辦法,。這個(gè)Expert果然不簡(jiǎn)單!  但如果你是著手建立一種全新細(xì)胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考,，那你就得花點(diǎn)時(shí)間自己試驗(yàn)了,。萬(wàn)事開(kāi)頭難嘛。因?yàn)闆](méi)有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)答案,。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?，shou選MEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng),、RPMI 1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)是一個(gè)好的開(kāi)始,。你也可以購(gòu)買幾種培養(yǎng)基來(lái)，然后花大約兩周的時(shí)間做一個(gè)簡(jiǎn)單的細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),，來(lái)選擇其中zui適合的,。有時(shí)候你會(huì)驚訝地發(fā)現(xiàn)你的zui佳培養(yǎng)條件與文獻(xiàn)報(bào)道的不同，就算是同一種培養(yǎng)條件,，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也時(shí)好時(shí)壞,，這是很正常的。因?yàn)樵噭?、水,、不同批?hào)的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性,，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手,。 

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以前大部分實(shí)驗(yàn)室都是用干粉培養(yǎng)基,，但配制過(guò)程就較為繁瑣，要溶解,、調(diào)pH值,，過(guò)濾，過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生一些濃度誤差,，而且有些實(shí)驗(yàn)室的水質(zhì)并不理想,，所以培養(yǎng)的效果會(huì)有差異。如果使用液體培養(yǎng)基,，這種人為的誤差會(huì)減少,，因?yàn)楫吘故谴笈抗I(yè)化生產(chǎn)的，批間差會(huì)很小,。大家是不是感覺(jué)液體培養(yǎng)基會(huì)貴很多,，以前是這樣，但現(xiàn)在非也,。HyClone和Invitrogen都在國(guó)內(nèi)建立了液體培養(yǎng)基的生產(chǎn)基地,，生產(chǎn)和運(yùn)輸成本大幅降低，所以現(xiàn)在的價(jià)格也只是50-60元/500ml,，比干粉培養(yǎng)基貴不了多少,，而且還幫你省了過(guò)濾器和時(shí)間。 

血清含有生長(zhǎng)因子可促進(jìn)細(xì)胞的繁殖,，含有附著因子可促進(jìn)細(xì)胞的貼壁,，同時(shí)還具有抗胰酶活性。血清同時(shí)也是礦物質(zhì),、脂類及激素的來(lái)源,。zui常用的血清有小牛血清、新生牛血清,、胎牛血清和馬血清等,。牛血清是按照采血時(shí)間的早晚來(lái)分類的。采血時(shí)間越早,，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)越豐富,，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合要求高的細(xì)胞系和克隆化培養(yǎng),。由于瘋牛病的原因,，到目前為止，我國(guó)政府仍然禁止從北美洲、歐洲和日本等地區(qū)進(jìn)口牛血清,，因此市面上的牛血清大多來(lái)自澳洲,、南美洲，或是國(guó)產(chǎn)的,。  而血清批次間的差別就是不可避免的,，這種差異來(lái)源于不同的制備方法和除菌方法、動(dòng)物的年齡差別及血清的儲(chǔ)存條件等,，而且與取血?jiǎng)游锏膩?lái)源關(guān)系密切,。不同的牧場(chǎng)、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質(zhì)量,。因此選好了一種血清就要盡可能長(zhǎng)期使用它,。在需要更換時(shí)，也要盡量保持與原有的一批血清相似,。

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現(xiàn)在很多公司都提供血清預(yù)留,，你一旦選定了某個(gè)批次的血清，zui好備足一年的量,，這樣可以避免很多麻煩,。血清固然是細(xì)胞培養(yǎng)中*的成分，但正如上文所說(shuō),，血清的批間差異大,，更換血清時(shí)需要做大量的測(cè)試以取保替換的血清與原來(lái)的相似。而血清的供應(yīng)也是必須要考慮的因素,。由于氣候或瘋牛病的影響,，說(shuō)不定哪天血清就突然沒(méi)得賣了，那對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響可非同小可,。另外,，血清的價(jià)格也很昂貴，雖說(shuō)現(xiàn)在也有便宜的國(guó)產(chǎn)血清,，但是高品質(zhì)的澳洲血清價(jià)格仍舊高起,。因此,，也有一些實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始換用無(wú)血清培養(yǎng)基,。 

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常備現(xiàn)貨液體培養(yǎng)基：