★CQ★細(xì)胞培養(yǎng)-消化要有個度

★CQ★上海蒂科生物專注生物科研試劑：胎牛血清（HAKATA,、Hylone、SERANA,、NTC,、Corning、BOVOGEN,、PAA,、SIGMA等），無外泌體血清(SBI),，ELISA試劑盒（HAKATA自主品牌,、進(jìn)口），2萬多株細(xì)胞（含400多種類通過STR鑒定）,，培養(yǎng)基（干粉,、液體），雙抗,，胰酶,，sigma試劑等，本公司供應(yīng)原裝胎牛血清,，*的服務(wù),、真誠的態(tài)度、堅(jiān)持以質(zhì)取勝,，做您的實(shí)驗(yàn)專家,。;。

★CQ★細(xì)胞培養(yǎng),，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng),，就細(xì)胞消化而言，多做,、善于總結(jié),，就可以把細(xì)胞養(yǎng)的越來越好。

★CQ★絕大部分細(xì)胞消化只要用胰酶潤洗一遍即可：

吸去胰酶后,，殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）,。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代,，對細(xì)胞傷害很大,。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去,，然后37度消化,。

★CQ★什么算是消化好了呢,？

不需要把細(xì)胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,，只要能移動了,，多半呈沙壯移動，其實(shí)已經(jīng)可以了,。

一般能移動了,，說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,，細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）,。這個時候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,，間隙很大,，才停止。

細(xì)胞就是*成單個細(xì)胞懸液,，之后在貼壁的過程中仍然會聚集,，這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性,，你可以嘗試,，準(zhǔn)備100%的單個細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞,，仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起,。

一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集,，不要過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液,。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞）,，吹打不超過20次（一般10次即可）,，成小規(guī)模聚集（10個細(xì)胞左右）是正常的，不要再去延長消化時間,，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn),。

★CQ★比較難消化的細(xì)胞：

潤洗方法5min還不能消化，以結(jié)腸癌細(xì)胞為例,，比如HCT15,、LS411和KM12細(xì)胞,，胰酶消化,，一般10 cm 培養(yǎng)皿，一次zui多加入300ul-500ul就足夠了,。即使這樣難消化的細(xì)胞,，一般不超過5min，即可見細(xì)胞成片移動，就應(yīng)該停止消化,。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候,，比如tsDC細(xì)胞，用胰酶孵育,，3min左右即可看到成片沙狀移動,。

★CQ★常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，受消化影響不是很大：

如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細(xì)胞例外）,。但少數(shù)實(shí)驗(yàn),，比如病毒包裝，對細(xì)胞代數(shù),，對細(xì)胞狀態(tài)要求*,。這個時候，胰酶消化,，就是潤洗,，都會對細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多,，細(xì)胞包裝能力就會逐漸下降,。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可,。這些鹽溶液通過影響細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)酶的活性,，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白,。

★CQ★EDTA的作用：

許多人不用胰酶,，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用,。這里要明白,，胰酶切割細(xì)胞外基質(zhì)的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子,，作用于整聯(lián)蛋白的活性,，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA,，或者對付特別難消化的細(xì)胞,，添加多一些EDTA，就是這個道理,。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話）,，而應(yīng)該想其它辦法。

★CQ★PBS洗滌：

消化之前用PBS洗滌,，是常見的操作,，因?yàn)檠逯泻幸种埔让傅牡鞍?。對于一些難消化細(xì)胞，可以配制不含Ca,，Mg離子的PBS,，因?yàn)檫@些離子也會抑制胰酶的活性。但對于絕大部分細(xì)胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化,，不需要配制不含Ca,，Mg離子的溶液。

每段時間定期對細(xì)胞房,、培養(yǎng)箱&水盤,、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個角落細(xì)菌,、真菌等微生物的清除,，每次操作完都整理好細(xì)胞房，帶好手套,、口罩,、鞋套，防止人為因素污染,。一旦發(fā)現(xiàn)污染,，及時處理。