BEN細胞BEN細胞的污染及制止

產(chǎn)品名稱：BEN細胞

貨    號：BEN

規(guī)    格：1~3*106細胞/25cm2培養(yǎng)瓶

BEN細胞BEN細胞的污染及制止
按現(xiàn)代的觀念,，凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存產(chǎn)生有害的成分和造成細胞不純的異物都應該視為污染。根據(jù)這一概念,，組織培養(yǎng)污染物應包括生物（真菌、細菌,、病毒和支原體）,、化學物質（影響細胞生存,、非細胞所需的化學成分）、細胞（非同種的其他細胞）,。其中一微生物zui為多見,。另外，隨著使用細胞種類增多,，不同細胞交叉污染,，尤其是Hela細胞的污染也時有發(fā)生，從而造成細胞不純,。
一,、污染途徑 污染物，特別是微生物常通過下列途徑進入培養(yǎng)體系,，造成污染
1,、空氣：空氣是微生物及塵埃顆粒傳播的主要途徑?？諝饬鲃有源?，如果培養(yǎng)操作場地于外界隔離不嚴格或消毒不充分，外界不潔空氣很容易進入造成污染,。因此,，培養(yǎng)設施不能設在通風場所。無菌操作應在凈化臺內進行,，工作時要帶口罩,，以免因講話、咳嗽等使外界污染進入操作面,，造成污染,。
2、器材：各種培養(yǎng)器皿,、器械消毒不*和洗刷不干凈導致污染,，另外需要對培養(yǎng)箱進行定期消毒，防止形成污染
3,、操作：實驗操作無菌觀念不強,，技術不熟練，使用污染的器皿或封瓶不嚴等,，都可以造成污染,。培養(yǎng)兩種細胞以上時，操作不規(guī)范,，交叉使用吸管或培養(yǎng)液,、瓶等有可能導致細胞交叉污染。
4,、血清：有些血清在生產(chǎn)時就已經(jīng)被支原體或病毒等污染,，變成了污染,。
5、組織樣本：原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本,；取材時碘酒消毒后脫碘不*,，可造成碘混入組織，細胞或培養(yǎng)液中,，影響細胞細胞生長。
二,、污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染的檢測
由于體外培養(yǎng)細胞自身沒有抵抗污染的能力,，而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養(yǎng)細胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無法挽回,。細胞污染早期或污染程度較輕時,，如果能及時去除污染物，部分細胞有可能恢復,、但是當污染物持續(xù)存在培養(yǎng)環(huán)境中,，輕者細胞生長緩慢，分類象減少,，細胞變得粗糙,，輪廓增強細胞漿出現(xiàn)顆粒、污染較嚴重,，細胞增值停止,，分裂象消失，細胞質中出現(xiàn)大量堆積物,，細胞變圓,、脫壁。
（一）細菌污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染物的檢測
常見的污染細菌有大腸桿菌,、假單孢菌,、葡萄球菌等。細菌污染初期由于培養(yǎng)體系的抗生素作用,， 其繁殖處于抑制狀態(tài),，細胞生長不受明顯影響，污染情況用倒置顯微鏡觀察不易判斷,。懷疑培養(yǎng)細胞有細菌污染時,，取10ml細胞懸液離心1000轉5分鐘，沉淀中加入無抗生素培養(yǎng)液2ml,將細胞放培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
如果培養(yǎng)無真的細菌污染,，24小時內可以獲得陽性結果。當污染的細菌量比較大或者細菌增殖到一定基數(shù)時,，大約每20分鐘一代,，會使培養(yǎng)系統(tǒng)中很快產(chǎn)生大量細菌,，后者不僅可以消耗培養(yǎng)系統(tǒng)中的養(yǎng)分，還能釋放大量代謝產(chǎn)物,。幾個小時后,，增殖的細菌就可以導致培養(yǎng)液外觀渾濁，肉眼就可以判斷,。細菌污染大多數(shù)可以改變培養(yǎng)液pH,，使培養(yǎng)液變渾濁、變色,。用相差顯微鏡觀察,，可見滿視野都是點狀的細菌顆粒，原來的清晰培養(yǎng)背景變得模糊,，大量的細菌甚至可以覆蓋細胞,，對細胞的生存構成威脅。用青霉素,、鏈霉素可以預防細菌污染有效,。
（二）真菌污染對細胞的影響及污染物的檢測
微生物污染中以真菌zui多，真菌種類繁多,，形態(tài)各異,，但是污染后易于發(fā)現(xiàn)，大多呈白色或淺黃色小點漂浮于培養(yǎng)液表面,，肉眼可見,；有的散在生長，鏡下可見呈絲狀,、管狀,、樹枝狀，縱橫交錯穿行于細胞之間,。念珠菌和酵母菌卵圓形,，散在細胞周邊和細胞之間生長。真菌生長迅速,，能在短時間內抑制細胞生長,、產(chǎn)生有毒物質殺死細胞?？拐婢苿︻A防和排除真菌污染有效,。
（三）支原體污染對細胞影響及污染物的檢測
細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題,是細胞培養(yǎng)zui常見的、干擾試驗結果的一種污染,。但由于不易被察覺,，有些污染的細胞仍在被應用。研究表明,，95％以上是以下四種：口腔支原體（M.orale）,、精氨酸支原體（M.arginini）,、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性,。以上是zui常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調查證明,，大約有二十多種支原體能污染細胞,，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。據(jù)查,，目前各實驗室使用的二倍體細胞和傳代細胞中約有11%的細胞受到支原體污染,。
污染來源包括工作環(huán)境污染、操作者本身污染（一些支原體在人體是正常菌群）,、培養(yǎng)基污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染,、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染,。支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺,，實則細胞手到多方面潛在影響,，如引起細胞變形，影響DNA合成,，抑制細胞生長等,。
細胞培養(yǎng)中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環(huán)境污染,；嚴格實驗操作,；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素,。
支原體污染細胞后,，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體,，常用方法有抗生素處理,、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理,。支原體zui突出的結構特征是沒有細胞壁,，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素,，如 -內酰胺類,、萬古霉素等*不敏感,；對多粘菌素（polymycin）、利福平,、磺胺藥物普遍耐藥,。對支原體zui有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內酯類及一些氟喹諾酮,；其他類抗生素如氨基糖苷類,、氯霉素對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑,。
（四）細胞交叉污染對細胞的影響及污染物的檢測
細胞培養(yǎng)中,，細胞間交叉污染并不罕見，多是由于在培養(yǎng)中操作時各種細胞同時進行,，混雜使用器皿和液體所致,，這種污染能使細胞的生長特性、形態(tài)特征等發(fā)生變化,，有些變化較輕,、不易察覺，有些可能由于污染的細胞具有生長優(yōu)勢zui終壓過原來細胞而導致細胞的生長抑制,，zui終死亡,。常用觀察細胞形態(tài)學、分析生長特性和核型,、檢測細胞的標記物等方法檢測交叉污染的細胞,。