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液相色譜柱知識之液相色譜保護柱的使用及維護
今天開講之前,，先給大家看一組九宮格圖,，開開眼界~~
這是將色譜柱的入口端打開后的樣子,，也就是色譜柱中先接觸到樣品的填料,。
正常的色譜柱入口端填料絕大多數(shù)應(yīng)該是白白的,、平整的，而這些是受到嚴重污染的色譜柱——變色,、堵塞,、雜質(zhì)蓄積......
OMG！
柱子造的都沒“柱”樣了,！
那怎么辦,？
如何避免色譜柱過早地“夭折”呢？
辦法還是有滴~~
通常,，在分析柱前面，安裝一支保護柱就能大大減少損失,。
那么,，今天我們一起來學習一下，保護柱的重要性吧,。
1,、 為什么要使用保護柱？
2,、 哪些樣品需要使用保護柱,？
3、 保護柱會不會影響分離效果,？
4,、 如何選擇保護柱？
5,、保護柱的使用及注意事項有哪些,？
01
為什么使用保護柱呢？
樣品上機檢測前,，一般會經(jīng)前處理去除雜質(zhì),，但是不能*避免，來自于樣品及色譜系統(tǒng)的微小的固體顆粒物,、色素雜質(zhì),、未沉淀的蛋白等，可能會滯留在色譜柱中,，從而導致色譜柱耐用性差,、壽命縮短,。
保護柱是安裝在分析柱之前的小柱，能起到分離凈化的作用,，大大降低分析柱受污染的程度,，延長分析柱使用壽命，因此為您節(jié)省很多的耗材費用,。
02
哪些樣品需要使用保護柱,？
常規(guī)的液相色譜檢測中均需要使用保護柱，特別是對于食品,、中藥,、天然產(chǎn)物、合成中間體,、復雜制劑及血漿等生物樣品的檢測,，因待測基質(zhì)的復雜性，可能會導致色譜系統(tǒng)壓力升高,、色譜柱堵塞,、填料變色、測試結(jié)果不準確等各種影響,。
03
保護柱會不會影響分離效果,？
通常來講，理想的保護柱填料與分析柱填料一致,，具有相同的選擇性,，被測物基本上全被洗脫出來，不會影響待測物的響應(yīng)值,。
保護柱柱長選擇恰當?shù)脑?，不會產(chǎn)生峰擴散，也基本不會引起分離度的降低,。
圖1 是安裝卡套式保護柱后的對比色譜圖,，保留時間略微有延遲（原因是安裝了保護柱，色譜柱相當于長了一點點）,?？傮w來講，卡套式保護柱對分析結(jié)果基本無影響,。
圖1
【液相條件】
色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGIII-H S3; 2.0 mm i.d. x 100 mm
保護柱：CAPCELL PAK C18 MGIII-H S3; 2.1 mm i.d. x 5 mm
流動相：60%乙腈
流 速：0.5 mL/min
溫 度：40℃
檢 測：UV 254 nm
樣 品：萘（峰4）
04
如何選擇保護柱,？
1、保護柱與分析柱應(yīng)具有相同填料,、相同粒徑,、相同內(nèi)徑，以確保選擇性一致（同一個品牌）,。
2,、一般長度為10mm的保護柱可以起到充分的保護作用,，過長的話可能會引起待測物的譜帶擴張。
3,、盡量選擇可更換柱芯的的保護柱,，柱芯價格相對便宜，易于使用和維護,，而且死體積小,。
4、如果是用于UHPLC柱,，還要考慮一下保護柱的耐壓能力,。
05
保護柱的使用及注意事項有哪些？
安裝
1,、卡套式保護柱一般標注液流方向,，請按照色譜柱標簽所示方向進行安裝，盡量不要雙向混用,。
2,、卡套式保護柱可以更換柱芯，對于CAPCELL PAK 系列保護柱,，即使柱芯內(nèi)徑不同,，只要柱芯的長度相同，柱套既可通用,。
3、保護柱與卡套組裝好后,，請直接連接在色譜柱入口端,。一般用手擰緊卡套即可，如有漏液發(fā)生,，可再使用扳手擰緊30°,，用力太過有可能導致壓環(huán)變形。
使用注意事項
1,、專柱,，避免保護柱成為不同項目的交叉污染源。
2,、當色譜峰的理論塔板數(shù)下降,，柱壓上升，或是關(guān)鍵分離度下降時,，都應(yīng)該及時更換保護柱,。
3、不慎發(fā)生強污染時,，可以將分析柱卸下,，單獨沖洗保護柱,，可以使污染物更快的從保護柱中流出。
4,、保護柱或柱芯一般不建議超聲清洗,，因可能對填料表面修飾有影響，當柱效下降時直接更換柱芯,。
后,，再給大家介紹2款靠譜的保護柱吧，一款是應(yīng)用于HPLC的保護柱,，另一款是應(yīng)用于UHPLC的保護柱,。
TIPs 知識擴展
1 CAPCELL PAK 卡套式保護柱 （應(yīng)用于HPLC）
產(chǎn)品特點
1、應(yīng)用于高效液相色譜,，CAPCELL PAK 系列分析柱均有配套的保護柱,。
2、CAPCELL PAK 保護柱,，即使柱芯內(nèi)徑不同,，只要柱芯的長度相同既可通用。
3,、只對單價較低的柱芯進行更換即可實現(xiàn)對分析柱的保護,。
.2 CAPCELL EXP 卡套式保護柱 （應(yīng)用于UHPLC）
產(chǎn)品特點
1、高耐壓 100 MPa,，可用于超高效液相色譜,。
2、幾乎無擴散,，對分離的影響降低到極低限度,。
3、可直接連接到色譜柱上,，不會產(chǎn)生死體積的影響,。
4、不需要工具,，用手擰緊即可簡便連接,。