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液相分析常見問題⑥ 峰面積變來變?nèi)o法定量

閱讀:6938        發(fā)布時(shí)間:2019-7-22


峰面積是定量分析的基礎(chǔ),,峰面積的變化會(huì)導(dǎo)致精密度、標(biāo)曲,、定量分析等一系列問題,。

 

那么,,如果遇到峰面積不穩(wěn)定的情況,我們要怎么辦,?讓我們分三種情況分別來看一看:

 

一、峰面積變小

 

1. 儀器漏液

儀器漏液會(huì)導(dǎo)致樣品損失,,與正常測定結(jié)果相比,,會(huì)出現(xiàn)色譜峰減小的情況,。

→這種時(shí)候,,需要檢查系統(tǒng)壓力,確保所有螺絲或連接處無漏液情況,,排查儀器方面的原因。

 

2. 樣品穩(wěn)定性不好

有些樣品自身穩(wěn)定性不好,,配置后,隨著進(jìn)樣時(shí)間的推移會(huì)出現(xiàn)降解現(xiàn)象,。

→如果連續(xù)進(jìn)樣過程中,,主峰的峰面積減小,,同時(shí)伴隨雜質(zhì)峰面積增加的情況,建議確認(rèn)樣品在溶劑或流動(dòng)相中的穩(wěn)定性情況,。

 

3. 進(jìn)樣瓶中樣品量過少

當(dāng)樣品瓶中樣品過少可能導(dǎo)致進(jìn)樣針未吸取到足夠樣品進(jìn)樣,。

添加樣品或使用內(nèi)襯管即可解決,。

 

4. 針峰面積減小

進(jìn)樣瓶的瓶蓋擰緊后,,瓶內(nèi)會(huì)出現(xiàn)負(fù)壓,可能導(dǎo)致進(jìn)樣器取樣不準(zhǔn)確,。

→第二次進(jìn)樣時(shí),由于瓶蓋已經(jīng)有孔,,負(fù)壓消除后進(jìn)樣峰面積會(huì)恢復(fù)正常;也可通過使用預(yù)開口進(jìn)樣小瓶來解決該類問題,。

 

二,、峰面積變大

 

可能是由于色譜柱或流動(dòng)相條件導(dǎo)致樣品吸附,,特別是一些帶電荷情況較為復(fù)雜的蛋白或多肽類樣品。

→大濃度進(jìn)樣,、平衡可能的吸附位點(diǎn)

更換色譜柱優(yōu)化方法

(推薦更換MG、MGII,、或Proteonavi進(jìn)行嘗試)

 

▲CAPCELL PAK 聚合物包被結(jié)構(gòu)示意圖

 

Proteonavi

 

Proteonavi是采用在多孔球形硅膠填料表面鍵合丁基(C4的高性能蛋白質(zhì)•多肽分析色譜柱,。該填料既具有硅膠類填料的高分離能力耐壓性,,又具有耐酸性抑制蛋白質(zhì)吸附等特長,。

 

★ 具備*的耐酸性

★ 填料表面的蛋白吸附,即使樣品量少也能被檢出

★ 可對應(yīng)從分析到制備的規(guī)模擴(kuò)大化

 

三,、峰面積忽大忽小,,變化無規(guī)律

 

1. 自動(dòng)進(jìn)樣器故障或混入氣泡

→進(jìn)樣過程中,,觀察進(jìn)樣針中無氣泡混入,如果自動(dòng)進(jìn)樣器出現(xiàn)故障,,需要咨詢相應(yīng)品牌儀器工程師,。

 

2. 樣品過于黏稠會(huì)導(dǎo)致進(jìn)樣不準(zhǔn)確

稀釋樣品通常可以解決

 

3. 進(jìn)樣瓶中混入氣泡

→部分樣品容易混入氣泡,,比如一些表面活性劑類樣品,觀察進(jìn)樣瓶中是否有小氣泡,,或者對進(jìn)樣瓶進(jìn)行超聲脫氣,。

 

PS: 以上對策主要針對液相分析檢測中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn)的情況,,如果在質(zhì)譜分析中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn),則可能會(huì)有離子化,、基質(zhì)效應(yīng)等其他原因,。

 

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