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測定人血漿中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的檢測方法
說起補(bǔ)鈣,，營養(yǎng)專家認(rèn)為：生長期,、孕期、更年期,、老年期要補(bǔ) ,，鈣的補(bǔ)充是一種常態(tài)，而且會貫穿人一生,。每個人都需要補(bǔ)鈣,，但是大部分時候，我們只需通過日常飲食就可以獲取所需的鈣元素。而那些真正需要額外補(bǔ)充鈣劑的,，多是處于青春期,、孕期、更年期,、老年期這些階段的人群,。
鈣能不能吸收和維生素D是否缺乏有關(guān)
我們補(bǔ)鈣的目的是為了骨骼的健康，從口服鈣到沉積在骨骼上的幾個環(huán)節(jié)都需要維生素D參加,。維生素D是骨骼健康的重要指標(biāo),，主要功能是維持人體內(nèi)鈣的代謝平衡以及骨骼形成。研究表明維生素D缺乏會引起一系列疾病,，與人體免疫功能異常,、心血管疾病、代謝性疾病,、自身免疫性疾病,、腫瘤等密切相關(guān)。由于公眾增加關(guān)注維生素D缺乏對于身體健康的影響,，在過去的幾年內(nèi),，樣品數(shù)量檢測大大增加。
維生素D (Vitamin D) 是類固醇的衍生物,，又可分為維生素D2（麥角鈣化醇）和維生素D3（膽鈣化醇）,。維生素D2體內(nèi)無法產(chǎn)生，來自于飲食攝取,，多含于植物性食物中,，它是由植物的麥角固醇經(jīng)陽光照射而合成的。人體皮下儲存有從膽固醇生成的7-脫氫膽固醇,，受紫外線的照射后,，可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D3，也可從強(qiáng)化奶或其他肉類食物中獲得,。
所以臨床對25-羥維生素D的濃度監(jiān)測具有非常重要的意義,，評估維生素D營養(yǎng)狀態(tài)，協(xié)助對高鈣血癥,、骨質(zhì)疏松癥,、佝僂病、甲狀旁腺亢進(jìn)和25羥化缺陷等疾病的臨床診斷,，指導(dǎo)臨床醫(yī)生對心血管疾病,、自身免疫病、糖尿病和某些藥物的治療與補(bǔ)充,。
多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,，人體血中25-羥維生素D營養(yǎng)判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：
目前常用的檢測25-羥維生素D含量的方法有競爭性蛋白結(jié)合法（CPBA）,、放射免疫法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,、化學(xué)發(fā)光免疫測定法（CLIA）,、液相色譜法（HPLC）等,。這些方法大部分耗時,、步驟冗雜，無法滿足臨床簡便,、高通量的要求,；并且血液中 維生素D濃度太低，檢測限達(dá)不到要求,。
這次我們?nèi)耘f使用明星產(chǎn)品SOLA HRP對血漿樣品進(jìn)行預(yù)處理,，使用Syncronis C18色譜柱保留分離VD，建立了測定人血漿中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的檢測方法,。
前處理步驟：
10mg 2mL SOLA HRP 96 孔板
（PN：60309-001）
活化
500℃甲醇,，500μL 含2% 甲酸的水
上樣
200μL 血漿
清洗
200μL 含水/ 甲醇(60:40)
洗脫
200μL 甲醇2 次
40℃氮氣吹干后用水:
乙腈定容到100μL
LC方法：
色譜柱:
Syncronis C18 1.7μm 50×2.1 mm
（PN：97102-052130）
流動相:
A: 水+0.1% 甲酸
B: 乙睛+0.1% 甲酸
梯度方法:
2min 內(nèi)，70-100%B
流速:0.8mL/min
柱溫:40℃
進(jìn)樣量:50μL
靈敏度：
LOQ 5ng/mL
線性范圍：
血漿中25- 羥基Vit D2 和25- 羥基Vit D3在5 -1000ng/mL 濃度范圍成線性,，r2=0.9968 和0.9981
回收率結(jié)果：
血漿樣品添加25-OH Vit D2 和25-OH Vit D3 的回收率>94%,，RSD<4.0%。
體內(nèi)維生素D濃度的準(zhǔn)確定量是診斷維生素D缺乏相關(guān)疾病診斷和治療反饋效果的重要指標(biāo),。采用SOLA HRP對樣品進(jìn)行預(yù)處理,，Syncronis C18液相色譜柱保留，所得25-OH-VD2 和 25-OH-VD3的LOQ,、標(biāo)準(zhǔn)曲線,、回收率均符合臨床檢測要求，具有非常高的靈敏度,、特異性和準(zhǔn)確性,，適用于血漿基質(zhì)中維生素D臨床樣本的快速檢測。
后小編啰嗦一句,，體內(nèi)維生素D的水平,，決定每個人補(bǔ)充維生素D的利弊。我們不推薦沒有任何理由地普遍補(bǔ)充維生素D,。