ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高,、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用已經(jīng)相當(dāng)普及，絕大多數(shù)是用于檢測(cè)未知樣本中抗原的濃度?，F(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國(guó)產(chǎn)也有進(jìn)口，數(shù)量繁多令人目不暇接,，而且質(zhì)量也是參差不齊,，那么我們?cè)鯓硬拍苓x出zui適用的產(chǎn)品呢？首先要根據(jù)我們所要檢測(cè)的分子進(jìn)行檢測(cè),，除此以外也還有一些需要加以考量的因素,，下面就為大家提供幾點(diǎn)參考,。
1. 實(shí)驗(yàn)類型
ELISA試劑盒有多種類型，不過(guò)它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),，就是進(jìn)行抗原捕獲,。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,，In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,，然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),。
通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間,，這種方法既靈敏又有效,，受到了許多研究者的青睞。不過(guò)有時(shí)候雙抗夾心法并不是*選擇,，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著,，又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下,，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA就更為適用,，這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無(wú)標(biāo)記的抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，以結(jié)合捕獲抗體,。

2. 抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,，對(duì)于雙抗夾心法而言,，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,，隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原,。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體（不論多抗還是單抗）的配對(duì)很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原上的同一位點(diǎn),，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊,。如果捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突，就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響,。要避免這一問(wèn)題,，我們可以選擇購(gòu)買“matched pair"的捕獲/檢測(cè)抗體對(duì)，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過(guò)驗(yàn)證才推薦的好組合,。

3. 交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性,。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素,。盡管現(xiàn)在購(gòu)買源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問(wèn)題,。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí),，檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng),。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,，實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,，來(lái)避免上述問(wèn)題,。
與此同時(shí)，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer）,，以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測(cè)結(jié)果收到影響,。

4. 檢測(cè)方式
如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如通常使用的辣根過(guò)氧化物酶HRP）,，而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）,。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,，可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶,。酶可以結(jié)合在一抗上,，ELISA試劑盒也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合,。此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè),、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等,。

上述四點(diǎn)涵蓋的問(wèn)題就已經(jīng)很多了,，如果您對(duì)考慮購(gòu)買的ELISA試劑盒還有任何疑問(wèn)，都可以直接向我們咨詢,。我們的上也有相應(yīng)的技術(shù)資料提供,，可以從中獲取有價(jià)值的產(chǎn)品信息。