植物花青素合成酶（ANS）試劑盒（ELISA）

使用說(shuō)明書(shū)

l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)組織、細(xì)胞及相關(guān)液體樣本中植物花青素合成酶（ANS）的活性,。

l 有效期：6個(gè)月

l 保存條件：2-8℃

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被植物花青素合成酶（ANS）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的植物花青素合成酶（ANS）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度,。

需要而未提供的試劑和器材

• 酶標(biāo)儀（450nm）
• 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
• 37℃恒溫箱
• 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

備注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：240、120,、60,、30、15,、7.5 U/ml

2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

• 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
• 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
• 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
• 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
• 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。
• 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
• 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
• 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。
• 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
• 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.   樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL,；空白孔不加。
4.   除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.   棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.   每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計(jì)算出樣品的濃度,。

試劑盒性能

•  檢測(cè)范圍：7.5 U/ml – 240 U/ml,。
•  靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于1.0 U/ml,。
•  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
•  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。