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本試劑盒僅供研究使用,。
大鼠葡萄糖6磷酸脫氫酶(G6PD)檢測試劑盒使用目的:
本試劑盒用于測定血清、血漿及相關液體樣本中待測物質的含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平,。用純化的待測物質抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質,,再與HRP標記的待測物質抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),,通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度,。
試劑盒組成
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融,。
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同),、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘,。
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
大鼠葡萄糖6磷酸脫氫酶(G6PD)試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果,。
3.各步加樣均應使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4.請每次測定的同時做標準曲線,,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
10.如與英文說明書有異,,以英文說明書為準。
大鼠葡萄糖6磷酸脫氫酶(G6PD)試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃,。
2.有效期:6 個月
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