規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×2瓶,，4℃保存,。試劑一：粉劑×1瓶,，常溫保存,。

微量法

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支,，10mg單寧酸，4℃保存,。臨用前加入1.175mL提取液溶解為5000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液,。

產(chǎn)品說明：

單寧又稱植物多酚，是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物,。單寧可作為潛在的生物標(biāo)記物,；與蛋白質(zhì)結(jié)合的能力又稱為收斂性或澀性。其收斂性是多種生理活性的基礎(chǔ),，如止血,、抗腫瘤、抗衰老等生理活性,，也是影響產(chǎn)品口感的因素之一,。

根據(jù)光譜特性，單寧在275nm下有較強(qiáng)的紫外吸收,，通過利用活性炭能夠特異吸附單寧的性質(zhì)來檢測單寧含量,。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、離心機(jī)、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔UV板和蒸餾水。

測定操作：

1,、樣本處理：

將樣本烘干至恒重,，粉碎，過40目篩之后,，稱取約0.05g,，加入1mL提取液，封口膜封口防止液體濺出,，于70℃水浴提取30min,，期間可搖晃數(shù)次。12000rpm,，25℃,，離心10min，取上清,，用提取液定容至1mL,，待測。

2,、操作步驟：

（1）紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,，波長調(diào)至275nm。蒸餾水調(diào)零,。

（2）將5000nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為6.25,、3.125、1.5625,、0.78625,、0.4、0.2nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

（3）加樣表：

充分混勻震蕩5min,，13000g 離心20min。取200µL上清液測定275nm下的吸光度,，分別記為A測定管,、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管,、A空白管,，計(jì)算?A測定=A對照管-A測定管，A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管,。

單寧含量計(jì)算：

1,、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,，以A標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得到方程y=kx+b,，將?A測定帶入方程中得到x（nmol/mL）

2、單寧含量計(jì)算：

1. 按蛋白濃度計(jì)算：

單寧含量（nmol/mg prot）=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr,。

2. 按樣本鮮重計(jì)算：

單 寧 含 量 （nmol/g 鮮 重 ）=x×V 提 取 ÷W =x÷W ,。Cpr： 樣品蛋白濃度，mg/mL（蛋白濃度需重新用PBS提取測定）,；W：樣品質(zhì)量,，g；V提?。?/span>

提取液體積,，2mL。

注意事項(xiàng)：

1,、 當(dāng)?A大于1.5時,，建議將樣品上清液用提取液稀釋更大倍數(shù)后測量；?A過小時,，建議減少稀釋倍數(shù)或增加樣品質(zhì)量來測定,。