Mouse OPN ELISA試劑盒參考數(shù)值

1.  檢測范圍：6.25 ng/mL – 200 ng/mL,。

2.  靈敏度：檢測濃度小于1.0 ng/mL,。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應,。

 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被小鼠骨橋素（OPN）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠骨橋素（OPN）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值

驗結(jié)果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,，標準品的濃度值為縱坐標,，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度。