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果糖-1,6-二磷酸酶測試盒使用說明
測定意義:果糖-1,6 二磷酸酶又稱果糖1,6 二磷酸酯酶,,催化1,6 二磷酸果糖和水生成6 磷酸果糖和無機磷,在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關鍵性的作用,。
測定原理:FBP 催化1,6 二磷酸果糖和水生成6 磷酸果糖和無機磷,在反應體系中添加的磷酸葡萄糖異構酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,,340nm下測定NADPH增加速率,,即可計算FBP 活性。
需自備的儀器和用品:分光光度計,、恒溫水浴鍋,、臺式離心機、可調式移液器,、1 mL 石英比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水。
樣本處理
1,、組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,,加入 1mL 提取液)進行冰 浴勻漿。于 4℃,,8000g,,離心 10min,取上清,,置冰上待測,。
2、細胞:按照細胞數(shù)量(10 4 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液),,冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,,超聲 3 秒,間隔 7 秒,,總時間 3min),,于 4℃,8000g,,離心 10min,, 取上清,置冰上待測,。
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