豬環(huán)磷酸鳥苷ELISA試劑盒操作程序

樣本處理及要求

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘,，取上清即可,，或將上清置于-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。
2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測,，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞,，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融,。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測。

4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。

 豬環(huán)磷酸鳥苷ELISA試劑盒操作程序

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度,。

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

3. 各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標準品孔di一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計算時請乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6. 底物請避光保存。

7. 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9. 本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 試劑盒2-8℃冷藏,，保質(zhì)期6個月