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上海仁捷生物科技有限公司

JAK2種屬全實驗使用

時間:2019/9/9閱讀:885

JAK2種屬全實驗使用實驗規(guī)則:
1,、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,,液滴會自然流下去。       
2,、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體,。也可以用酶標儀的晃動功能。
3,、溫浴時,,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發(fā),。
4,、洗板時,每次洗液加入后,,應靜置1分鐘,,使清洗更加*。沒有洗板機時,,倒去液體后,,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
5,、洗液不夠時,,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,,加入0.1%的吐溫6作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體,;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次,。
自動洗板:如果有自動洗板機,,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。


JAK2種屬全實驗使用計算:
以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,,   
在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD     
值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋     
倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標     
準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值     
代入方程式,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋     
倍數(shù),,即為樣品的實際濃度。


JAK2種屬全實驗使用樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
 

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