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牛Arg-1檢測(cè)試劑盒(ELISA法)僅供科研ELISA試劑盒特點(diǎn)
一 ,、靈敏,、特異的抗體,;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,;
三,、吸附性能好,空白值低,,孔底透明度高的固相載體,;
四、適用血清,、血漿,、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型,;
五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。
牛Arg-1檢測(cè)試劑盒(ELISA法)僅供科研ELISA試劑盒操作步驟:
1. 加標(biāo)準(zhǔn)品:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,,依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul(建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6. 加酶:除空白孔外每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
牛Arg-1檢測(cè)試劑盒(ELISA法)僅供科研標(biāo)本的采集及保存
1. 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果,,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。
4. 細(xì) 胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右 (2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
5. 組 織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),,其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
牛Arg-1檢測(cè)試劑盒(ELISA法)僅供科研應(yīng)用領(lǐng)域:僅供科研使用,,不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。
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