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人原纖維蛋白1(FBN1)ELISA試劑盒定量檢測實驗規(guī)則:
1,、將液體加到酶標(biāo)孔中時,,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,,液滴會自然流下去,。
2,、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,,混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
3,、溫浴時,,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā),。
4,、洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,,使清洗更加*,。沒有洗板機時,倒去液體后,,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干,。
5、洗液不夠時,,可用蒸餾水自行配制PH7.4,,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫6作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存,。
洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機,,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
人原纖維蛋白1(FBN1)ELISA試劑盒定量檢測計算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),,OD值為縱坐標(biāo),,
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋
倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
人原纖維蛋白1(FBN1)ELISA試劑盒定量檢測樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
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